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microRNA-374b抑制乳腺恶性肿瘤细胞增殖和转移的作用机制
目的 探讨microRNA-374b抑制乳腺恶性肿瘤细胞增殖和转移的作用机制.方法 构建microRNA-374b过表达的稳转MDA-MB-231细胞和空载MDA-MB-231细胞.通过MTS细胞增殖实验、单克隆形成实验、细胞划痕实验和细胞凋亡检测,计算细胞增殖相对数、划痕修复百分比和细胞凋亡百分比.通过microRNAs专业网站的预测筛选和双荧光素实验分析其可能的下游基因.采用实时定量PCR检测乳腺癌组织和癌周组织中人单核粒细胞趋化因子(MCP)-1和microRNA-374b含量.结果 乳腺癌组织中的microRNA-374b相对表达量为0.43±0.03,显著低于癌周组织中的1.15±0.04(P＜0.05).MDA-MB-231-2396细胞的microRNA-374b相对表达量为0.53±0.20,显著高于MDA-MB-231-NC细胞的0.18±0.02(P＜0.05).培养第5、7天时MDA-MB-231-2396细胞增殖相对数分别为9.00±0.74、16.06±0.23,显著低于MDA-MB-231-NC细胞的14.23±0.55、31.92±2.56(P值均＜0.05).MDA-MB-231-2396细胞结晶紫洗脱液的光密度值为0.54±0.02,显著低于MDA-MB-231-NC细胞的1.35±0.05 (P＜0.05).MDA-MB-231-2396细胞早期凋亡百分比为(44.92±1.56)％,显著高于MDA-MB-232-NC细胞的(2.60±0.04)％(P＜0.05).MDA-MB-231-2396细胞于培养16、24、48 h时的划痕修复百分比分别为(13.27±5.72)％、(18.25±8.43)％、(28.22±9.46)％,均显著低于MDA-MB-232-NC细胞的(25.48±0.53)％、(47.35％±1.40)％、(80.23±2.61)％(P值均＜0.05).双荧光素实验结果显示,MCP-1 3'UTR野生型与microRNA-374b类似物组合转染入293T细胞后两种荧光素的比例显著低于MCP-1 3'UTR突变型与microRNA-374b类似物组合(P＜0.05),MCP-1 3'UTR野生型与microRNA-374b抑制物组合转染入293T细胞后两种荧光素的比例显著高于MCP-1 3'UTR突变型分别与microRNA抑制物的对照物、microRNA-374b、microRNA-374b类似物的对照物组合(P值均＜0.05).乳腺癌组织中MCP-1的相对表达量为5.79±1.32,显著高于癌周组织的0.07±0.01(P＜0.05).结论 microRNA-374b可通过抑制MCP-1的表达来抑制乳腺恶性肿瘤细胞的增殖和转移能力,并促进其凋亡.
关键词： microRNA-374b 人单核细胞趋化蛋白-1 乳腺肿瘤细胞 增殖 转移
