首页 > 文献资料
-
UTP经PLC-IP3信号通路调控猪冠状动脉平滑肌细胞自发性瞬时外向电流
本文采用全细胞穿孔膜片钳技术研究uTP对急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞(coronary artery smooth muscle cells,CASMCs)自发性瞬时外向电流(spontaneous transient outward currents,STOCs)的作用,探讨细胞内Ca2+释放在UTP产物三磷酸肌醇(inositol 1,4,5.trisphosphate,IP3)调控STOCs过程中的作用机制.结果显示:(1)UTP(40 gmol/L)可明显激活CASMCs的STOCs,使其幅度和频率分别增~0(57.54±5.34)%和(77.46±8.42)%(P<0.01,n=38).(2)磷脂酶C(phospholipase C,PLC)阻断剂U73122(5 gmol/L)可明显抑制STOCs的活性,使其幅度和频率分别降低(31.04±7.46)%和(41.65±16.59)%(P<0.05,,n=10);细胞外再加入UTP小能再次激活STOCs(n=7).(3)L型电压依赖性钙通道(L-type voltage-dependent Ca2+channels,L-VDCCs)阻断剂verapamil(20 gmol/L)和CdCl2(200 gmol/L)几乎不影响UTP对STOCs活性的调节(n=8).(4)1 gmol/L的bisindolylmaleimide I[Bisl,蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的特异性阻断剂]可明显激活STOCs,使其幅度和频率分别增加(65.44±24.66)%和(61.35±21.47)%(P<0.01,n=12),细胞外再加入UTP(40 gmol/L)可使STOCs的幅度及频率进一步明显增加(P<0.05,P<0.01,n=12),细胞外继续加入ryanodine(50 gmol/L)则可完全阻断STOCs.(5)UTP(40 gmol/L)预处理细胞后,IP受体(IP3 receptors,IP3Rs)阻断剂2-aminoethoxydiphenyl borate(2-APB,40 gmol/L)可使STOCs的幅度降低(24.08±3.97)%(P<0.05,n=8),对其频率的影响较小(n=8);而80 gmol/L的2-APB则可明显抑制STOCs的活性,使其幅度和频率分别降低(31.43±6.34)%和(40.59±19.01)%(P<0.05,P<0.01,n=6),细胞外继续加入高浓度的ryanodine(50 Bmol/L)可完全抑制STOCs(n=6).用2-APB(40 gmol/L)或ryanodine(50 gmol/L)预处理细胞后,UTP(40 gmol/L)不能再次激活STOCs.以上结果提示:UTP主要通过PLC-IPl信号通路激活急性酶分离的猪CASMCs的STOCs,IP3Rs和ryanodine受体(ryanodine receptors,RyRs)介导的细胞内Ca2+释放在此过程中发挥重要作用.
-
川芎嗪对猪冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的作用
本工作旨在研究川芎嗪对猪冠状动脉平滑肌细胞钾通道的作用,为阐明其扩张冠状动脉血管的机制提供实验依据.采用膜片钳细胞贴附式和内面向外式记录方式观察川芎嗪对猪冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(large-conductance Ca2+-activated potassium channels,BKCa channels)的作用,分别用蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂H-89和蛋白激酶G(protein kinase G,PKG)抑制剂KT-5823处理细胞,再观察川芎嗪对BKCa通道作用的变化.结果表明在研究的0.73～8.07mmol/L浓度范围,川芎嗪可以剂量依赖性地激活BKCa通道,使通道的开放概率从(0.01±0.003)增加到(0.03±0.01)～(1.21±0.18)(P＜0.01,n=10),使通道平均关闭时间从(732.33±90.67)ms降低到(359.67±41.30)～(2.96±0.52)ms(P＜0.01,n=10).川芎嗪的这种激活作用在浴液游离钙离子浓度接近0 mmol/L时也存在.PKA的特异性抑制剂H-89(3μmol/L)和PKG的特异性抑制剂KT-5823(1 μmol/L)对川芎嗪激活BKCa通道的作用无影响.以上结果提示:川芎嗪能直接激活冠状动脉平滑肌BKCa通道,这种作用可能是川芎嗪扩张冠状动脉血管的一种重要机制.
关键词： 川芎嗪 大电导钙激活钾通道 猪冠状动脉平滑肌细胞 膜片钳技术 -
UTP对猪冠状动脉平滑肌细胞BKCa通道作用机制的研究
目的:利用膜片钳技术,研究UTP对急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞上BKCa通道的作用,探讨生理条件下UTP调节BKCa通道的机制.方法:应用Cell-attached技术记录急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞上BKCa电流.用pCLAMP9.0软件系统进行数据采集及分析.结果:在Cell-attached膜片上,80 μM UTP可明显激活BKCa通道(P＜0.05,n=21).PLC抑制剂U73122可抑制UTP对BKca的激活作用(P＜0.05,n＝5).PKC激动剂PMA(10nM),可使BKCa通道开放概率明显降低(P＜0.05,n=9).UTP(80μM)预处理细胞之后,IP3抑制剂 2APB(80μM),可使BKCa通道开放受抑(P＜0.05,n=6).结论:在Cell-attached 膜片上,UTP能激活猪冠脉平滑肌细胞BKCa通道.PLC信使转导通路中的IP3介导的胞内Ca2+释放是UTP激活BKCa通道的重要途径.
-
Cell-attached膜片上,咖啡因对猪冠状动脉平滑肌细胞KCa的调节作用
目的:研究咖啡因对猪冠状动脉平滑肌细胞KCa通道的调控机理,以期揭示胞内钙库RyR激活后,局部钙离子浓度升高和KCa的关系.方法:采用急性酶分离方法,应用膜片钳单通道电流记录技术记录大脑皮层神经元猪冠状动脉平滑肌细胞上KCa通道电流活动.电流信号经放大、滤波及A/D、D/A转换后输入微机进行采样和储存.实验数据应用CLAMP9.0软件系统进行数据采集及分析.结果:在cell-attached膜片上咖啡因对KCa通道有明显的作用,咖啡(0.1-5.0 mM)可以增加通道的开放概率(NPo),呈现出浓度依赖性,开放时间延长,关闭时间也随之缩短,而对电流幅值无明显影响,开放概率的增加是通过明显缩短平均关闭时间实现的(n=8,P＜0.05);洗去药物后通道活性可以一定程度的恢复到对照水平,再加入一定浓度咖啡因(如1.0mM)可再次激活KCa,激活程度与洗脱前较接近.结论:在细胞贴附式构型上咖啡因浓度依赖性地激活KCa,有饱和性.可能是通过影响胞内信号转导过程而调控KCa活性.
关键词： 咖啡因 BKCa 猪冠状动脉平滑肌细胞 离子通道 膜片钳技术
