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芳香族氨基酸左旋脱羧酶文献资料
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酪氨酸羟化酶和左旋芳香族氨基酸脱羧酶基因的细胞表达及活性检测
由于在帕金森病中合成多巴胺所需的酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和左旋芳香族氨基酸脱羧酶(aromatic L-amino acid decarboxylase,AADC)活性明显降低,所以补充多巴胺合成酶成为基因治疗帕金森病研究的主要手段.我们分别构建了重组逆转录病毒载体pHCX/TH及pNCX2/AADC,通过脂质体介导将带有目的基因的载体分别转到包装细胞PA317中,经筛选得到产病毒的细胞PA317/TH和PA317/AADC,采用免疫组化、原位杂交方法检测目的基因表达;细胞经裂解后进行的酶促反应产物多巴胺以高压液相电化学方法检测证明所克隆的TH及AADC基因具有功能活性;这两种基因工程改造细胞可以完成酶促动力学的功能,使L-dopa及多巴胺产生明显增加.本研究为用TH和AADC双基因对帕金森病进行基因治疗提供了一定的依据.
