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类风湿关节炎患者外周血单个核细胞IL-21R mRNA的检测及其临床意义
目的 建立检测类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMc)IL-21R mRNA的巢式实时荧光定量PCR的方法.研究IL-21R mRNA在RA PBMc中的表达水平并探讨其临床意义.方法 根据IL-21R mRNA序列,跨内含子设计外引物,采用巢式实时荧光定量PCR方法.首次扩增以增加原始模板浓度,并以减少引物、酶的浓度及循环次数的方法保持扩增片段的特异性,再以首次扩增产物为模板,进行二次PCR扩增作实时荧光定量检测;以β-actin作内参,以二者比值作为IL-21R mR-NA表达水平的指标.结果 60例RA患者与30例健康人对照相比,RA患者组IL-21R mRNA表达上调(JP<0.01);将RA患者关节功能分级作IL-21R mRNA表达水平比较,Ⅰ级、Ⅱ级相比无显箸差异(P>0.05);Ⅰ级、Ⅱ级分别与Ⅲ级以上相比,差异显著(P<0.01);RA活动期IL-21R mRNA水平较非活动期增高,治疗后IL-21R mRNA的表达明显下降,治疗前后比较有显著差异(P<0.01).结论 IL-21R mRNA在RA患者PBMc中高表达,其表达水平对RA的诊断和治疗具有重要的参考价值.本文建立的检测方法重复性好,敏感且特异,可作为一种常规检测手段应用于临床.
关键词： IL-21R 类风湿关节炎 巢式实时荧光定量PCR 外周血单个核细胞 -
巢式实时荧光定量PCR检测RA患者外周血单个核细胞TGF-βR Ⅱ mRNA
目的 建立检测人外周血单个核细胞(PBMc)中转化生长因子βⅡ型受体(TCF-β RⅡ)mRNA实时荧光定量PCR方法,并探讨其在RA中的临床意义.方法 跨内含子设计外引物,并根据扩增片段,设计一对内引物,采用巢式实时荧光定量PCR(nestecl-reall-time-PcR)方法.首次扩增采用减少引物、酶浓度、及循环次数的方法保持扩增片段的高度特异性,再进行第二次PCR扩增作实时荧光定量检测,同时以β-actin作内参,二者比值作为TGF-βRⅡ表达水平指标.结果 Ct值和模板起始浓度对数值之间具有良好的线性关系(r2=0.999);检测低浓度可达101拷贝.RA患者组和健康对照组的TGF-βRⅡ与β-actin的比值分别为0.45±0.11和0.37±0.10,两者有显著差异(P<0.01);RA治疗前、后两者比值分别为0.46±0.11和0.40±0.11,治疗后下降13.0%.结论 巢式实时灾光定量PCR检测PBMC中TCF-βRⅡmRNA的方法简便,特异,重复性好,可信度高,其表达水平对RA具有一定的诊断价值,并可作为评价该病治疗效果的一种方法.
关键词： TGF-βRⅡ 类风湿关节炎 巢式实时荧光定量PCR 基因表达
