首页 > 文献资料
-
五重荧光定量RT-PCR法检测甲型流感病毒
目的 建立一种五重荧光定量RT-PCR检测并鉴别流感病毒A(Flu A)及血凝素H3、H5、H7基因亚型的方法.方法 以人细胞核糖核酸酶P(RNase P)基因为内参照,用Primer Express 3.0软件设计PCR特异性引物和探针.构建质粒标准品用于分析该方法的灵敏度和重复性,利用不同来源的呼吸道病毒样本进行特异性分析.结果 该法检测Flu A、H3、H5、H7以及RNase P质粒标准品的灵敏度均达102 copies/mL,特异性达100％,各对引物和探针仅检测出相应的病毒,未有交叉反应,变异系数(CV)≤1.99％.结论 建立的五重荧光定量RT-PCR法灵敏度、特异性高,重复性好,可用于检测出多种甲型流感亚型,对甲型流感病毒不同亚型早期诊断具有一定的价值.
-
四重荧光定量RT-PCR检测人感染新型甲型禽流感H7N9病毒
目的 建立检测人感染新型甲型禽流感H7N9病毒的四重荧光定量RT-PCR方法.方法 以人细胞RNA酶P(RNase P)基因为内参,用Primer Express3.0软件设计PCR特异性引物和探针.通过不同来源的呼吸道病毒进行特异性分析,构建质粒标准品用于分析该方法的灵敏度和重复性,并对1 896例临床标本进行回顾性检测.结果 该方法检测甲型流感病毒(Flu A)、H7、N9与RNaseP灵敏度均达102 copies/mL,特异性达100％,每对引物和探针只检测出相应的病毒,无交叉反应,检测变异系数(CV)均低于1.55％.用该法检测1 896例临床标本,结果Flu A 235例,H7N9 127例,与其他试剂报告结果完全一致.结论 建立的四重荧光定量RT-PCR法可快速检测H7N9病毒,灵敏度与特异性好,可用于H7N9病毒感染患者的早期诊断.
