首页 > 文献资料
-
多重荧光定量RT-PCR检测高致病性H5N6禽流感病毒
目的 建立一种快速检测流感病毒A型(FluA)及高致病性禽流感(HPAI) H5N6病毒感染的荧光定量RT-PCR法.方法 以人细胞核糖核酸酶P(RP)基因作为临床样本的内参基因,用Primer Express 3.0软件设计PCR特异性引物和探针,建立一种检测FluA及HPAI-H5N6病毒的一步法多重荧光定量RT-PCR方法,评估其灵敏度、特异性,并与上海之江公司提供的试剂及测序法进行比较.结果 建立的多重荧光定量RT-PCR法检测Flu A、H5、N6及RP质粒标准品的灵敏度均达102copies/mL.各对引物和相应探针仅检测出相应的病毒,在这些病毒和常见病原分析中未发现存在交叉反应,特异性达100％.用该法检测135例临床标本,结果显示FluA为23例,未发现HPAI-H5N6病毒的感染者;与上海之江公司提供的试剂的检测结果及基因测序结果一致.结论 建立的一步法多重荧光定量RT-PCR法可用于FluA及HPAI-H5N6病毒感染患者的早期诊断.
-
五重荧光定量RT-PCR法检测甲型流感病毒
目的 建立一种五重荧光定量RT-PCR检测并鉴别流感病毒A(Flu A)及血凝素H3、H5、H7基因亚型的方法.方法 以人细胞核糖核酸酶P(RNase P)基因为内参照,用Primer Express 3.0软件设计PCR特异性引物和探针.构建质粒标准品用于分析该方法的灵敏度和重复性,利用不同来源的呼吸道病毒样本进行特异性分析.结果 该法检测Flu A、H3、H5、H7以及RNase P质粒标准品的灵敏度均达102 copies/mL,特异性达100％,各对引物和探针仅检测出相应的病毒,未有交叉反应,变异系数(CV)≤1.99％.结论 建立的五重荧光定量RT-PCR法灵敏度、特异性高,重复性好,可用于检测出多种甲型流感亚型,对甲型流感病毒不同亚型早期诊断具有一定的价值.
-
应用多重荧光定量RT-PCR技术检测麻疹病毒的适用性分析
目的 验证多重荧光定量RT-PCR方法用于麻疹病原学诊断的准确性,探讨其在麻疹快速检测方面的适用性.方法 对吉林省2013年的149例麻疹疑似病例咽拭子标本,进行多重荧光定量RT-PCR、双重荧光定量RT-PCR实验,对52份获得麻疹病毒序列的标本进行多重荧光定量RT-PCR和序列分析实验,并将2组实验结果分别进行对比分析.结果 多重荧光定量RT-PCR检测结果与麻疹/风疹双重荧光定量RT-PCR检测结果一致,均得到140份麻疹阳性标本、9份阴性标本,一致率为100％;多重荧光定量RT-PCR检测结果与序列分析结果均显示JL/M-13-3号标本为疫苗株A基因型,其他51份标本为野毒株H基因型,结果 吻合率为100％.结论多重荧光定量RT-PCR是一种快速、灵敏、准确的实验方法,适用于快速诊断麻疹病例、及时鉴别麻疹H基因型野病毒和A基因型疫苗株引起的病例.
关键词： 多重荧光定量RT-PCR 麻疹病毒 检测 -
多重荧光定量RT-PCR同时检测甲型乙型流感病毒
目的:建立一种快速、敏感、特异的多重荧光定量RT-PCR同时检测甲型、乙型流感病毒,并将建立的方法进行初步临床应用研究.方法:甲型、乙型流感病毒的引物及Taqman探针的设计,对甲型、乙型的探针标记不同的荧光素,优化多重荧光定量RT-PCR反应体系,检测该方法的灵敏度和特异度.并对40例疑似流感含漱液标本进行检测.结果:多重荧光定量RT-PCR对甲型和乙型流感病毒有较高的灵敏度和特异性,与麻疹病毒、风疹病毒、流行性腮腺炎病毒等呼吸道病毒无交叉反应,可直接从疑似患者含漱液标本中同时检测甲型或乙型流感病毒.结论:多重荧光定量RT-PCR不仅特异性高,而且比常规RT-PCR和病毒分离法更敏感、快速,也更简便.
关键词： 多重荧光定量RT-PCR 流感病毒 逆转录聚合酶链反应 细胞培养
