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突变敏感性分子开关文献资料
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突变敏感性分子开关检测线粒体DNA A1555G位点的条件优化
目的 对高保真酶介导的突变敏感性分子开关技术检测线粒体DNA(mtDNA) A1555G位点条件进行优化.方法 利用3'硫代磷酸化修饰的突变型引物和野生型引物作为下游引物,在其上游设计一条公共引物分别构成突变引物对和野生引物对,以构建好的包含mtDNA A1555G位点的突变型质粒和野生型质粒为模板,进行高保真聚合酶介导的双向引物延伸反应,对PCR体系中的退火温度、引物浓度、模板浓度等条件优化,通过凝胶成像系统对其PCR结果进行分析确定佳反应条件.结果 分子开关技术检测mtDNA A1555G位点的佳PCR条件:退火温度为61.0℃,引物浓度为0.6 μmol/L,检测模板浓度为103～106 copies/μL.结论 确定了分子开关技术检测mtDNA A1555G位点的佳反应条件,为该技术在线粒体DNA的突变筛查中的应用提供依据.
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校正PCR在性别鉴定中的应用
目的 研究校正PCR在性别鉴定中的可应用性.方法 采用突变敏感性"分子开关"介导的PCR针对Y染色体特定序列进行识别.实验包括三个方面:采用普通PCR,针对Y染色体M45(n2032631)位点设计特异性引物结合突变敏感性分子开关,对已知性别的样本进行检测;采用实时定量PCK和突变敏感性"分子开关",以及Y染色体特异性引物YO2对已知性别的样本进行检测;采用Y染色体特异性引物YO2对未知性别的男女模板进行检测.结果 本实验对所采用的小数量样本,在已知性别组与未知性别组的性别鉴定上均达到检测性别与实际性别完全相符,预示着该方法在性别鉴定上的巨大潜在应用价值.
