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氨基糖苷类耳聋文献资料
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突变敏感性分子开关检测线粒体DNA A1555G位点的条件优化
目的 对高保真酶介导的突变敏感性分子开关技术检测线粒体DNA(mtDNA) A1555G位点条件进行优化.方法 利用3'硫代磷酸化修饰的突变型引物和野生型引物作为下游引物,在其上游设计一条公共引物分别构成突变引物对和野生引物对,以构建好的包含mtDNA A1555G位点的突变型质粒和野生型质粒为模板,进行高保真聚合酶介导的双向引物延伸反应,对PCR体系中的退火温度、引物浓度、模板浓度等条件优化,通过凝胶成像系统对其PCR结果进行分析确定佳反应条件.结果 分子开关技术检测mtDNA A1555G位点的佳PCR条件:退火温度为61.0℃,引物浓度为0.6 μmol/L,检测模板浓度为103~106 copies/μL.结论 确定了分子开关技术检测mtDNA A1555G位点的佳反应条件,为该技术在线粒体DNA的突变筛查中的应用提供依据.