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一步法多重荧光定量聚合酶链反应文献资料
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一步法多重荧光定量RT-PCR检测人杯状病毒的建立及应用
目的 建立检测人杯状病毒(human calieivirus,HuCVs,主要包括SV、NoV-G Ⅰ和NoV-GⅡ)的一步法多重荧光定量RT-PCR (rRT-PCR)法.方法 用Primer Express 3.0软件设计特异性引物和探针,通过合成的对应病毒基因的质粒来评价该方法的灵敏度、特异性和重复性,检测临床标本并对阳性结果进行基因测序验证.结果 建立的rRT-PCR法检测SV、NoV-G Ⅰ和NoV-GⅡ的灵敏度均达到103 copies/mL,特异性为100％,且变异系数(CV)均≤1.275％.HuCVs检出率为21.43％(75/350),其中SV、NoV-G Ⅰ和NoV-GⅡ分别为14.67％(11/75)、21.33％ (16/75)和64.00％(48/75).随机选择检测阳性结果进行测序,结果均与该法检测结果一致.结论 建立的rRT-PCR法可同时检测并区分SV、NoV-G Ⅰ和NoV-GⅡ病毒,可用于HuCVs引起的急性腹泻散发和暴发疫情的监测.
关键词： 人杯状病毒 札如病毒 诺如病毒 一步法多重荧光定量聚合酶链反应
