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抗烟曲霉硫氧还蛋白还原酶GliT抗体对侵袭性曲霉病的诊断价值
目的 建立检测抗烟曲霉硫氧还蛋白还原酶GliT (TRG)抗体的ELISA法,评价其对侵袭性曲霉病(IA)的诊断价值.方法 选择非中性粒细胞缺乏症IA患者42例、中性粒细胞缺乏症IA患者34例、血培养为其他真菌或细菌的非IA患者155例及体检健康者200例作为研究对象.用重组TRG作为包被抗原建立检测血清抗TRG抗体的ELISA法,检测研究对象血清抗TRG抗体水平,并与半乳甘露聚糖(GM)试验比较.建立兔IA模型观察抗TRG抗体产生的情况.结果 ELISA法检测抗TRG抗体的cut off值为0.514.非中性粒细胞缺乏症IA患者抗TRG抗体A值为0.827(0.571,1.234),抗TRG抗体阳性率为81.0％ (34/42)；中性粒细胞缺乏症IA患者抗TRG抗体A值为0.445 (0.250,0.924),阳性率为41.2％ (14/34).非中性粒细胞缺乏症IA患者、中性粒细胞缺乏症IA患者组血清抗TRG抗体水平高于健康人+非IA患者对照组[0.191(0.134,0.293)],U分别为2 669.5、855,P均＜0.01.对于非中性粒细胞缺乏症IA患者,抗TRG抗体ELISA检测法的敏感性高于GM试验(81.0％vs 52.3％,x2=6.72,P＜0.01)；对于中性粒细胞缺乏症IA患者,GM试验的敏感性高于抗TRG抗体ELISA检测法(85.3％ vs41.2％,x2=6.72,P＜0.01).2者联合检测,可使诊断非中性粒细胞缺乏症和中性粒细胞缺乏症IA的敏感性分别提高至88.1％(37/42)和91.2％ (31/34).血清抗TRG抗体在IA初期阶段持续升高,抗真菌治疗有效后,抗TRG抗体水平逐渐降至正常.兔IA模型显示感染烟曲霉1周后即出现抗TRG抗体,且抗体滴度快速增高.结论 抗TRG抗体是辅助诊断非中性粒细胞缺乏症IA患者的潜在的标志物.
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抗曲霉硫氧还蛋白还原酶单克隆抗体的制备及鉴定
目的 制备烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR) GliT单克隆抗体(单抗)并进行鉴定.方法 取重组烟曲霉TR蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选分泌抗TR抗体的杂交瘤细胞,有限稀释法克隆化.用ELISA法测定抗体效价,IsoStrip鉴定抗体类、型,用western blot、免疫荧光分析技术和免疫组化染色鉴定单抗的特异性.结果 筛选到1株稳定分泌抗TR单抗(Anti-TR1)的杂交瘤细胞,抗体亚类为IgG1,轻链为κ型.ELISA法测定效价为5×105,能够与烟曲霉分泌蛋白及菌丝中天然TR特异性结合,还可与基因重组TR特异性结合.免疫荧光检测表明,该株单抗与烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉菌丝均发生反应,是曲霉属特异性的抗体.病理组织免疫组化染色结果显示,该抗体可与曲霉菌丝产生特异性反应.结论 获得了1株持续分泌高效价抗曲霉属特异性抗TR单抗的交杂瘤细胞株,为进一步的研究奠定了基础.
关键词： 曲霉 硫氧还蛋白还原酶GliT 单克隆抗体
