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人胃癌组织LIN28基因的定量检测及意义
目的 检测LIN28基因在胃癌组织及时应癌旁组织中的表达差异,分析其与临床参数间的关系及在胃癌发生、发展中的作用.方法 用Trizol提取总RNA,RT-PCR检测30例手术切除的胃癌组织及相应癌旁胃黏膜组织中LIN28 mRNA的表达,用SYBR实时荧光定量PCR进行比较.结果 胃癌组织和癌旁组织中LIN28 mRNA均为阳性;胃癌组织LIN28 mRNA的平均表达强度为1.80×10-4,癌旁组织的平均表达强度为7.41×10-4,经配对t检验,P<0.01,有统计学差异.LIN28的表达与其他临床参数无明显相关性(P>0.05).结论 胃癌组织LIN28 mRNA的表达较癌旁组织明显下降;LIN28的表达与患者年龄、性别、肿瘤的分化程度、有无淋巴结转移等无明显的相关性.
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SYBR实时荧光定量PCR检测人乳腺癌细胞AnnexinⅡmRNA方法的建立及应用
目的：建立检测人AnnexinⅡmRNA水平的SYBR Green实时荧光定量PCR方法，并用其测定人乳腺癌细胞MDA-MB-231和 MCF-7中AnnexinⅡmRNA水平。方法根据人AnnexinⅡ mRNA的保守序列设计特异性引物，提取人乳腺癌细胞总 RNA，并逆转录为cDNA，胶回收纯化PCR产物，并与pGM-T载体连接构建质粒标准品，进一步通过SYBR Green实时荧光定量PCR检测人乳腺癌细胞中 Annexin ⅡmRNA水平。结果该方法标准曲线的r2为0．997，融解曲线分析显示单个峰，pGM-T AnnexinⅡ质粒标准品高、低拷贝数的批内、批间变异系数分别为6．2％、7．8％（高拷贝）和9．1％、12．3％（低拷贝）。进一步研究表明人乳腺癌细胞 MDA-MB-231中 AnnexinⅡmRNA水平显著高于 MCF-7细胞（P＜0．01）。结论建立的检测人 AnnexinⅡmRNA水平的 SYBR Green实时荧光定量PCR方法特异性、重复性好，可用于人乳腺癌细胞中 AnnexinⅡ mRNA的定量检测。
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SYBR green实时荧光定量PCR检测VEGF mRNA方法的建立
目的:建立SYBR green实时荧光定量PCR检测VEGF mRNA水平的方法,并初步应用于美容相关疾患.方法:构建内参GAPDH质粒,倍比稀释VEGF和GAPDH标准品,建立PCR标准曲线,同时绘制熔解曲线,后应用SYBR Green实时荧光定量PCR检测正常皮肤、烧伤瘢痕、恶性黑素瘤细胞株A2058和WM793 cDNA的VEGF mRNA水平.结果:VEGF,GAPDH的标准曲线,符合线性要求,相关系数r均为1,熔解曲线峰值单一,产物特异度好,四组样本的SYBR green荧光定量PCR结果提示瘢痕组织、A2058,WM793的VEGF mRNA水平明显高于正常皮肤.结论:本研究成功建立了VEGF mRNA水平的SYBR green荧光定量PCR检测方法.
