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日本血吸虫虫卵毛蚴中带信号序列基因的全长cDNA序列分析
目的对带有信号序列的日本血吸虫虫卵毛蚴基因的全长cDNA序列进行分析.方法根据日本血吸虫虫卵毛蚴中带信号序列的cDNA片段序列设计合成基因特异性引物.以虫卵的第一链全长cDNA为模板,采用套式PCR,快速扩增带信号序列的虫卵毛蚴cDNA的5'、3'末端片段,将特异性扩增片段进行TA克隆与序列分析.将每个带信号序列的虫卵毛蚴cDNA片段序列与其5'、3'末端片段序列进行比对和拼接,构建每个带信号序列的虫卵毛蚴基因的完整全长cDNA序列,对部分带信号序列虫卵毛蚴基因的信号序列所对应的基因组序列结构进行分析.结果本研究分析了30个带有信号序列的cDNA片段,其中16个片段的5'、3'末端cDNA序列被成功扩增,并测定了它们的DNA序列,通过序列比对和拼接,获得了该16个虫卵毛蚴基因的全长cDNA序列.对开放阅读框演绎的氨基酸序列进行分析,发现基因SjP4001与SjP1531的信号肽序列完全相同,而基因SjP3742和SjP1183的信号肽氨基酸序列甚为相似,从而进一步证明不同的基因可拥有相同或相似的信号肽.基因组序列分析表明,基因SjP1183的信号肽基因序列与成熟肽基因序列通过交替拼接(alternative splicing)方式进行拼接;而基因SjP4001、SjP1531、SjP3742的信号肽基因序列与成熟肽基因序列之间可能是通过转移拼接的方式进行拼接.结论确定了16个带有信号序列的虫卵毛蚴基因的全长cDNA序列,虫卵毛蚴基因可通过交替拼接方式或转移拼接方式获得信号肽序列.
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兔骨保护素全长基因的获取
获得兔骨保护素(OPG)基因并分析序列.从兔肱骨中提取总RNA,逆转录形成cDNA,用5'RACE策略扩增OPG基因,经琼脂糖凝胶电泳鉴定,并测序及进行序列分析.兔OPG基因全长1 540 bp,编码400个氨基酸,与人OPG氨基酸序列相比,同源性为89％,而与大鼠等其它动物的同源性则在85％左右.5'RACE法成功获得了兔OPG基因的真实序列,为OPG基因的功能研究奠定了良好基础.
