首页 > 文献资料
-
Blebbistatin在成年小鼠心肌细胞原代培养以及GFP基因转导中的作用及其机制
目的 成年小鼠心肌细胞原代培养是一个有价值的研究工具,用以解决心脏疾病的细胞机制问题.该文旨在寻求一种高效特异的细胞收缩抑制剂(Blebbistatin,BS)来提高成年小鼠心肌细胞原代培养的细胞成活率并延长细胞培养时间,从而进一步提高转基因实验的效率.方法 通过肌细胞收缩抑制剂干预成年小鼠心肌细胞原代培养,运用生理学、药理学、细胞形态学和生物化学等学科的研究手段,从细胞成活率,腺病毒转导GFP基因并表达相应蛋白产物的效率等方面进行比较研究.结果 研究显示,25μM的BS较10mM的BDM而言,前者能够更大程度地提高成年小鼠心肌细胞原代培养的细胞成活率,延长细胞培养时间,以及能够稳定地维系培养过程中良好的细胞形态,并且高效地表达腺病毒转导GFP基因的蛋白产物.结论 BS是一种特异性的细胞收缩抑制剂,能够提高成年小鼠心肌细胞原代培养的细胞成活率并延长培养时间,从而提高由病毒介导的基因转导效率.
-
药物抑制非肌肉肌球蛋白Ⅱ对小鼠囊胚发育的影响
目的 探讨非肌肉肌球蛋白Ⅱ(non-muscle myosinⅡ,NMⅡ)ATP酶抑制剂(-)-Blebbistatin对小鼠早期胚胎体外发育过程及其干性相关基因表达的影响.方法 采用SPF级ICR品系小鼠,对10只雌鼠采用孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素进行诱导超数排卵,雌鼠与雄鼠1:1合笼.分别于E 0.5、E 1.5、E 2.5(受孕0.5、1.5、2.5天)收集胚胎.桑椹胚随机分为对照组和实验组,对照组液滴为20μl Ksom培养基,实验组液滴为加入25μM(-)-Blebbistatin的20μl Ksom培养基,体外培养24小时.进行免疫荧光标记,观察小鼠胚胎中微丝骨架的分布情况,以及桑椹胚中nanog、Oct4、sox2、ssea1和estrogen等5个干性相关基因的表达情况.结果 小鼠早期胚胎的发育经历细胞分裂后裂球数目增加、桑椹胚致密化、囊胚期囊胚腔的扩张过程.(-)-Blebbistatin组胚胎则无法形成囊胚腔进入囊胚时期,大多数胚胎裂球松散,整体呈扁塌状.实验共重复3次,实验组胚胎共62枚,均未能形成囊胚;对照组胚胎共60枚,全部形成囊胚.(-)-Blebbistatin抑制NMⅡ后小鼠胚胎干性相关基因nanog,Oct4,sox2,ssea1,estrogen的表达均明显低于对照组(P值均﹤0.05).结论 抑制NMⅡATP酶活性会阻滞小鼠囊胚的体外发育,并降低干性相关基因的表达.
关键词： 非肌肉肌球蛋白Ⅱ blebbistatin 桑椹胚 囊胚腔 细胞骨架
