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邻苯二甲酸二丁酯导致雄性大鼠子鼠尿道下裂畸形及其机制研究
目的:邻苯二甲酸二丁酯(DBP)孕晚期染毒诱导雄性SD大鼠子鼠发生尿道下裂畸形,并进一步探讨DBP致雄性子鼠发生尿道下裂的分子作用机制. 方法:孕鼠20只,怀孕14 ～ 18 d,随机分为对照组和DBP染毒组,每天分别予大豆油及DBP 750 mg/kg灌胃.出生后(PND)1 d,统计雄性子鼠中尿道下裂的发生率,观察尿道下裂雄性子鼠生殖结节的病理学改变.放射免疫法检测血清雄激素水平,实时荧光定量PCR和Western印迹检测生殖结节中雄激素受体(AR)、音猬因子(Shh)、骨形态发生蛋白4(Bmp4)和成纤维细胞成长因子8(Fgf8)的mRNA和蛋白表达水平. 结果:对照组中无尿道下裂发生,DBP染毒组中雄性子鼠尿道下裂发生率为43.6％,病理学检查发现生殖结节典型的尿道下裂畸形.尿道下裂雄性子鼠的血清雄激素水平[(0.49±0.05) ng/ml]较对照组[(1.12±0.05) ng/ml]明显降低(P＜0.05),生殖结节中AR、Shh、Bmp4和Fgf8基因的mRNA水平(0.50±0.05、0.65 ±0.07、0.42 ±0.05、0.46±0.04)较对照组(1.00±0.12、1.00 ±0.15、1.00±0.13、1.00±0.12)明显降低(P＜0.05),蛋白水平(0.34 ±0.05、0.51 ±0.07、0.43 ±0.05、0.57 ±0.04)较对照组(1.00±0.09、1.00±0.12、1.00±0.11、1.00 ±0.13)明显降低(P＜0.05). 结论:孕晚期DBP染毒可以导致雄性子鼠发生尿道下裂畸形.DBP通过降低雄性子鼠血清雄激素水平和生殖结节中AR、Shh、Bmp4、Fgf8基因的表达,影响生殖结节的正常发育,是DBP导致尿道下裂畸形发生的可能机制.
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邻苯二甲酸二丁酯干预雄激素依赖性FGF8信号通路致尿道下裂发生的实验研究
目的 通过检测邻苯二甲酸二丁酯(DBP)孕期染毒所致尿道下裂雄性大鼠仔鼠睾酮(T)、雄激素受体(AR)及成纤维细胞生长因子8(FGF8)的表达,研究DBP干预雄激素依赖性FGF8通路致尿道下裂发生的相关机制.方法 20只孕鼠随机分为两组,孕14～18 d,分别予大豆油及DBP 750 mg·kg-1 ·d-1灌胃.仔鼠出生第一天,统计仔鼠出生数、尿道下裂发生率.第七天时,称量雄性仔鼠体重,拍摄尿道下裂图片,分别取两组中尿道下裂仔鼠及正常仔鼠血清和生殖结节(GT),用放射免疫法检测仔鼠血清睾酮含量；用定量逆转录聚合酶链式反应(Real-time quantitative PCR)及WesternBlot检测AR与FGF8表达水平.结果 染毒组及对照组产仔数分别为9.10±0.99和12.60±1.26,仔鼠体重(g)分别为9.53±0.12和11.93±0.15,DBP的生殖毒性作用导致染毒组孕鼠产仔数及仔鼠体重明显减少(P＜0.05),雄性仔鼠尿道下裂发生率为37.2％.染毒组仔鼠血清睾酮浓度(41.85±8.38) ng/L、生殖结节中AR0.404±0.040及FGF 80.036±0.004的表达均明显低于对照组睾酮浓度( 107.40±24.28) ng/L、AR表达1.669±0.124及FGF8表达0.168±0.004(P＜0.05).结论 DBP对孕鼠有明显的生殖毒性,DBP通过干预雄激素依赖性FGF8信号通路,导致尿道下裂的发生.
关键词： 邻苯二甲酸二丁酯 尿道下裂 睾酮 雄激素受体 成纤维细胞生长因子8 -
FGF8辅助牙源性上皮诱导hDPSCs分化为成牙本质细胞及牙髓细胞
目的: 研究成纤维细胞生长因子8(FGF8)对成人牙髓干细胞(hDPSCs)定向分化为成牙本质细胞及牙髓组织的影响.方法: 首先分离、克隆培养hDPSCs,通过流式细胞术检测细胞表面标志物鉴定hDPSCs;矿化液中添加50 μg/L的FGF8诱导hDPSCs分化,通过real-time PCR检测分化后的细胞中牙本质涎磷蛋白(DSPP)、碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)和核心结合因子α1(Cbfa-1)在mRNA水平的表达;E11.5小鼠牙源性上皮联合FGF8与hDPSCs细胞团重组,再将组织块种植于裸鼠肾囊膜下培养,通过DNA原位杂交鉴定成牙本质细胞及牙髓细胞的来源.结果: 成功分离培养hDPSCs,其表面标志物CD29和CD90呈阳性表达;经FGF8诱导的hDPSCs形成较明显的矿化结节,并且牙本质特异性蛋白DSPP、BSP及Cbfa-1表达量上调;E11.5小鼠牙源性上皮联合FGF8可以诱导hDPSCs分化为成牙本质细胞及牙髓细胞.结论: FGF8能够辅助牙源性上皮定向诱导hDPSCs分化为成牙本质细胞及牙髓细胞,并形成牙本质及牙髓腔结构.
关键词： 成纤维细胞生长因子8 成人牙髓干细胞 成牙本质细胞
