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梅毒螺旋体体内诱生抗原Tp0462的表达鉴定及在临床血清学诊断中的应用评价
目的 筛选鉴定并评价梅毒螺旋体(Tp)体内诱生抗原Tp0462的临床血清学诊断价值.方法 提取Tp Nichols株全基因组,PCR扩增Tp0462,克隆构建重组质粒pET30a(+)-Tp0462,转化至E.coli Rosetta (DE3)菌,大量诱导表达重组蛋白Tp0462并纯化、鉴定.18只新西兰兔随机平均分为活Tp接种组、紫外线照射灭活Tp接种组和未接种对照组,接种后不同时间点抽血分离血清,用ELISA鉴定Tp0462蛋白的体内诱生性特点.ELISA法(Tp0462-ELISA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、梅毒初筛ELISA试验及快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)试验检测336份临床梅毒患者血清样本,初步评价该蛋白的诊断价值.结果 重组质粒Tp0462-pET30a(+)在E.coli Rosetta (DE3)中适的表达条件为0.5 mmol/L IPTG,20℃,180rpm摇床诱导培养4h.活Tp接种组血清Tp0462特异性抗体水平从第2周起呈急剧上升趋势,至5周后趋于平稳,而灭活Tp接种组及未接种对照组血清Tp0462特异性抗体水平一直处于低水平.活Tp接种组Tp0462特异性抗体水平显著高于灭活Tp接种组及未处理组(P＜0.05),而灭活Tp接种组与未处理组相比,差异无统计学意义(P=0.256).活Tp接种组、灭活Tp接种组Tp92抗体水平显著高于未处理组(P＜0.05),而活Tp接种组与灭活Tp接种组差异无统计学意义(P=0.127).与TPPA相比,Tp0462-ELISA的灵敏度和特异度分别为91.7％和98.8％,符合率为95.2％,曲线下面积为0.997.Tp0462-ELISA与梅毒初筛ELISA试验的符合率为92.3％,Kappa值为0.846;与RPR试剂盒的符合率为83.9％,Kappa值为0.293.结论 Tp0462在梅毒血清学诊断中具有较高的灵敏度和特异度,可以作为潜在的梅毒诊断候选蛋白.
