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抗TNFα全人抗体培养工艺的优化
利用Minitab软件进行DOE(Design of experiment,实验设计),考察不同基础培养基、流加物和基础添加物对工程细胞株B2-14(CHO DG44)的细胞密度和抗TNF-α全人抗体表达量的影响.其中基础培养基筛选采用单因素设计实验,流加物和基础添加物的筛选采用全因子分析实验设计.结果表明,经过培养工艺优化,工程细胞株B2-14的大密度由初的3.2×106 cells/mL增加到1.31×107cells/mL,蛋白表达量由72 mg/L增长到421 mg/L,分别增加309％和485％.同时发现,在工程细胞株生长过程中添加必需氨基酸、维生素、葡萄糖和微量元素,给予细胞必要的营养成分,有助于细胞数量的增长和活力的提高,也有利于抗体蛋白表达量的增加.生长因子虽有利于细胞的增长,但对蛋白的表达无影响.而脂类物质及胆固醇可以有效的提高抗体的表达量,但是过多会对细胞的生长有抑制作用.
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用重组大肠杆菌生产rhG-CSF高密度发酵的方法
目的:优化重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor, rhG-CSF) 的生产工艺,了解菌体生长和产物合成规律,为rhG-CSF的工业化生产提供依据. 方法: 以摇瓶发酵的研究结果为基础,在5 L发酵罐中,测定工程菌rhG-CSF的生长曲线,根据在不同pH值、溶氧和诱导时机时工程菌生长的情况,研究重组大肠杆菌DH5(/pBV220生产rhG-CSF分批补料培养的工艺条件,确定5 L发酵罐稳定的发酵工艺参数.结果: 培养工程菌的优化条件为: 发酵前期流加2 mol/L的氢氧化钠控制pH值为7.2,当开始诱导表达时,控制pH为6.8;溶氧水平控制在50%以上;选择菌体在对数生长中期A600 nm值为12.0进行诱导表达. 在此优化的培养条件下,菌体A600 nm值达到(21.3±0.9),细胞干质量可达(12.3±0.7) g/L,细胞湿体积质量为(43.8±0.9) g/L,rhG-CSF的表达量为(41.9±1.6)%. 结论: pH值、溶氧和诱导时机等培养条件对工程菌生长和表达有显著影响.
