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海洋真菌多糖间接竞争ELISA检测方法的建立及方法学评价
目的 建立酶联免疫吸附法(ELISA)以检测海洋真菌多糖YS4108发酵过程中抗肿瘤多糖(YCP)的含量. 方法 以CDAP(1-氰基-4-二甲胺吡啶四氟硼酸盐)为交联剂制备YCP-BSA偶联产物,利用该偶联产物为包被抗原,YCP为竞争抗原,两者与定量的YCP-McAb反应,建立栓测YCP的间接竞争ELISA测定法. 结果 佳抗原包被浓度为2.5 mg/L,佳单抗工作浓度为1:5 000,HRP-抗小鼠IgG工作浓度为1:4 000.得到回归方程lg(B/B0%)=-0.171 8 lgCYCP+1.963 8,r=0.991 6,可测量适范围为1～1 000μg/L,小检测量为0.1μg/L,批内和批间RSD分别小于5.45%和8.37%. 结论 建立了快速测定YCP含量的间接竞争ELISA法.
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1株能产生抗肿瘤多糖的海洋真菌YS4108的鉴定
目的 鉴定1株能产抗肿瘤多糖的海洋真菌YS4108.方法 根据菌株形态特征、生理生化特性、部分核糖体序列进行分析、鉴定.结果 该菌株为草茎点霉(Phoma herbarum).结论 形态加分子指纹法进行真菌分类鉴定是1种可靠、快速的鉴定方法.
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海洋真菌YS4108抗肿瘤多糖YCP发酵条件的优化
目的 寻找优化的摇瓶发酵条件,以提高菌株YS4108抗肿瘤多糖YCP的得率,为工业化发酵生产铺垫.方法 采用单因数和正交设计的方法,以YS4108菌丝体得率、粗多糖含量或YCP收获率为指标,优化培养条件和碳源、氮源及无机盐配方.结果 该菌佳摇瓶发酵培养条件为:28℃,初始pH 6.0,120 r/min,7 d,1 L摇瓶装液量400 mL;佳发酵配方为:蔗糖2.5%,玉米粉1%,NaNO3 0.2%,酵母膏0.2%,KH2PO4 0.05%,MgSO4·7H2O 0.05%,KCl 0.05%,FeSO4 0.000 1%,人工海水100%.结论 该发酵工艺YCP收获率为0.227 2 g/L,为优化前工艺的3.6倍,具有良好的应用前景.
