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抗HBsAg单链抗体特异性单克隆抗体的制备及应用
目的 获得抗HBsAg单链抗体 (HBScFv)的单克隆抗体,并初步研究其在抗HBsAg类小分子抗体及其融合蛋白质的纯化、活性鉴定方面的应用.方法 利用杂交瘤技术,以大肠杆菌表达的重组抗HBScFv为抗原,免疫Balb/c小鼠,再将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合.通过ELISA法、Western-blot鉴定特异性单克隆抗体,通过免疫双扩散法鉴定单抗亚型,并将筛选到的高效价单抗用于抗HBsAg Fab抗体等重组蛋白质的亲和色谱及ELISA鉴定.结果 建立了9株能够稳定分泌抗HBScFv特异性单克隆抗体的细胞株,其细胞上清效价为1:160～1:12 800,腹水效价为1:50 000～1:400 000;单克隆抗体的亚类分析结果显示有6株为IgG1,其余3株为IgG2a.初步应用结果 表明制备的单克隆抗体14F7可用于抗HBsAg Fab抗体等重组蛋白质的亲和色谱及活性鉴定.结论 成功建立了能够稳定分泌HBScFv特异性单克隆抗体的细胞株.
关键词： 抗HBsAg单链抗体 单克隆抗体 制备 -
人源抗HBsAg单链抗体与α干扰素融合蛋白酵母表达载体的构建
目的构建以人HBsAg单链抗体(HBScFv)为导向作用、α干扰素为治疗作用的融合蛋白酵母表达载体pPICZαB/ScFv-IFN-α.方法通过重叠PCR构建目的蛋白质基因,再亚克隆到酵母表达载体pPICZαB中,DNA测序后,转化巴氏毕赤酵母宿主菌GS115,菌落PCR、高浓度Zeocin 抗性筛选鉴定重组酵母,重组酵母经甲醇诱导后,通过SDS-PAGE分析鉴定表达产物.结果 DNA测序结果显示构建的目的基因片段(HBScFv-IFN-α)的序列与原设计序列相符合;菌落PCR结果显示目的基因已整合到酵母菌中;诱导表达后,SDS-PAGE结果显示在相对分子质量约44 000处可见目的蛋白质表达带.结论成功构建了抗HBsAg单链抗体与α干扰素融合蛋白酵母表达载体.
关键词： 抗HBsAg单链抗体 α干扰素 融合蛋白 酵母表达载体
