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双抗体夹心 ELISA 法研究 rMBP-NAP在大鼠体内的药代动力学
目的：研究重组麦芽糖结合蛋白-中性粒细胞激活蛋白（ rMBP-NAP ）在大鼠体内的药代动力学。方法：给大鼠静脉注射rMBP-NAP后在不同时间点采血，用双抗体夹心酶联免疫法（ ELISA ）测定rMBP-NAP的血浆浓度，然后用DAS2．1药动学软件进行曲线拟合并计算药代动力学参数。结果：rMBP-NAP静脉给药后迅速入血，2．5、5和10 mg· kg －13种剂量的消除半衰期分别为1．983、1．747和2．006 h，血浆清除率呈非剂量依赖性改变，血浆药物浓度—时间曲线下面积随着剂量的增加而成比例增加；rMBP-NAP在大鼠体内的分布以肾脏高，其后为肺和肝，以脑组织中浓度低。结论：rMBP-NAP给药后能迅速进入血液循环，其消除符合线性动力学特征，rMBP-NAP在大鼠体内的药代动力学过程符合二室开放模型，呈一级动力学消除，给药后主要分布到肾脏。
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幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白与麦芽糖结合蛋白融合表达产物rMBP-NAP的分离纯化
目的:从E.coli TB1(pMAL-c2x-napA)细菌中分离纯化与麦芽糖结合蛋白融合表达的重组幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白rMBP-NAP,筛选幽门螺杆菌口服疫苗抗原组分.方法:0.3 mmol/L IPTG在37℃,230 r/min条件下诱导基因工程菌E.coli TB1(pMAL-c2x-napA)3 h.4℃4 000 g离心20 min收获细胞.过柱缓冲液重悬细胞,-20℃冻存过夜,在冰水浴中超声破碎工程菌,4℃,9 000 g离心30 min,十二烷基磺酸钠-聚炳烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析工程菌中rMBP-NAP可溶性;低相对分子质量蛋白Marker做标准对照,GeneTool测定诱导蛋白相对分子质量.FPLC分子排阻层析法分离rMBP-NAP;SDS-PAGE凝胶扫描法测纯化蛋白质的纯度,Bradford法检测蛋白质含量.结果:E.coli TB1(pMAL-c2x-napA)诱导表达的rMBP-NAP主要以可溶性形式存在于超声上清中,占上清中蛋白总量的39.35%,相对分子质量约为57 000,与预期结果一致;分子大小排阻层析一步法纯化rMBP-NAP纯度可达91%,含量可达0.121 g/L.结论:FPLC分子排阻层析可从大肠工程菌超声菌液中快速纯化rMBP-NAP.
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rMBP - NAP 依赖 IL -12/IL -23轴对肝癌 H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究
目的：研究 rMBP - NAP 在肝癌 H22荷瘤小鼠模型中的肿瘤生长抑制作用以及 IL -12/ IL -23在其发挥抗肿瘤作用中的角色。方法 BABL/ c 小鼠左前肢腋下皮下注射2×106个 H22肿瘤细胞，建立荷瘤小鼠模型，荷瘤后第2天将小鼠随机分为两组，PBS 组和 rMBP - NAP 组，并通过皮下瘤旁注射给药的方式进行治疗，期间监测肿瘤体积。取荷瘤小鼠脾脏制成单细胞悬液，分为对照组和抗体阻断组，同时加入丝裂霉素 C 处理过的 H22细胞和 rMBP - NAP 与脾细胞共培养，抗体阻断组中分别加入 anti - IL -12抗体和 anti - IL -23抗体，对照组中加入同型抗体。于培养3 d 和7 d 后检测 IFN -γ的表达。结果相对于 PBS 组，rMBP - NAP 治疗组小鼠的肿瘤生长显著减缓。rMBP - NAP 刺激后，荷瘤小鼠脾细胞分泌大量 IFN -γ，共培养3 d 和7 d 后，IFN -γ表达持续累积。anti - IL -12抗体和 anti - IL -23抗体阻断后，均可导致 IFN -γ的表达量显著性下降。结论 rMBP - NAP 能够显著性抑制 H22荷瘤小鼠肿瘤的生长。
