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前体PCR文献资料
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人胰岛素样生长因子前体基因的重组、表达及其蛋白纯化
目的:构建含有人胰岛素样生长因子(human insulin-like growth factor-1,hIGF-1)前体编码全长cDNA的重组载体,使其在E.coli BL21(DE3)中表达,并对此表达菌株所表达的重组蛋白进行纯化,同时探讨其抗原性及应用价值.方法:采用PCR法,扩增编码hIGF-1前体cDNA的片段,通过双酶切、胶回收纯化、连接后得到pET32a(+)/hIGF-1重组载体,然后将其转化入BL21(DE3)中,经IPTG诱导后表达的重组蛋白经镍柱亲和层析纯化,并用Western blot法检测重组蛋白的抗原活性.结果:重组质粒pET32a(+)/hIGF-1经双酶切鉴定和测序分析后证实构建成功.BL21(DE3)表达的重组蛋白经SDS-PAGE电泳后显示,其表达量占细菌总蛋白量的25%左右,该重组蛋白经镍柱亲和层析纯化后其纯度高达90%以上.Western blot结果显示非常清晰的免疫印迹条带,表明此重组蛋白具有免疫学特异性.结论:pET32a(+)/hIGF-1重组载体构建成功,并能够高效表达.
关键词： 人胰岛素样生长因子-1 前体PCR 重组蛋白 亲和层析
