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水泡性口炎病毒包膜糖蛋白文献资料
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HIV-1 假病毒的构建及对人原发性渗出性淋巴瘤细胞系的感染研究
目的:分离、克隆水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)的包膜糖蛋白(VSV-GP)编码基因,包装人类免疫缺陷病毒1型human immunodeficiency virus-1,HIV-1)假病毒,并研究其对人原发性渗出性淋巴瘤细胞系 BCBL-1 细胞的感染状况.方法:根据GenBank登记的VSV-GP基因核苷酸序列设计1对PCR引物,其5'端分别引入HindⅢ和BamH Ⅰ酶切位点.以质粒 pHCMV-G为模板,PCR扩增VSV-GP基因,经双酶切后定向克隆进真核表达载体 PcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒 pVSV-GP.重组质粒经酶切鉴定、核酸序列测定和分析后与含包装和复制功能缺陷的 HIV-1 基因组重组质粒 pNL4-3.Luc.R-E-共转染人胚肾HEK 293T细胞.收获细胞进行Western blot,检测HIV-1 p24蛋白的表达;收获HIV-1假病毒感染 BCBL-1 细胞,进行虫荧光素酶(Luciferase)报告基因活性检测以及用ELISA的方法检测感染后细胞上清中 HIV-1 p24蛋白的含量.结果:PCR分离、克隆的 VSV-GP 序列全长1 536 bp,序列经过核酸分析证实;Western blot在 HIV-1 p24 蛋白预期位置检测到特异性条带;HIV-1 假病毒感染 BCBL-1 细胞后上清可以检测到HIV-1 p24蛋白,并且测得 Luciferase 活性值较对照组显著增高(P<0.05).结论:成功包装了 HIV-1 假病毒,并且该病毒可以感染 BCBL-1细胞.
