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脐血CD34+造血干细胞来源的树突状细胞体外培养体系的优化
目的:优化脐血CD34+造血干细胞(HPC)来源的树突状细胞(DCs)诱导培养方法,为体外研究CD34+HPC诱导产生功能性树突状细胞(DCs)的影响因素奠定基础.方法:淋巴细胞分离液(Ficoll)分离获得脐血单个核细胞,免疫磁珠阳性分选CD34+HPC,并用流式细胞术鉴定CD34+HPC纯度;比较GT(GM-CSF+TNF-α)方案和GTI(GM-CSF+TNF-α+IL-4)方案及GTI方案中TNF-αt和IL-4不同时段加入对诱导培养产生的DCs成熟的影响;通过激光共聚焦显微镜观察细胞形态,流式细胞仪分析细胞表型及3H-TdR检测DCs激发异体T细胞增殖能力.结果:免疫磁珠阳性分选CD34+HPC纯度可达90%以上;将CD34+HPC按GT方案和GTI方案进行培养,均可诱导产生DCs,但经GT方案诱导的DCs CD14表达较高,CD80、CD86、CD83、CD1a表达不如经GTI方案诱导的高;而GTI方案中,以TNF-α0 h加入、IL-4 48 h加入诱导培养的DCs各表型表达相对较佳,并具有激发异体T细胞增殖能力.结论:CD34+HPC经过合适的培养体系能够诱导分化为功能性DCs,以GM-CSF与TNF-α 0h加入、IL-4 48 h加入的GM-CSF+TNF-α+IL-4方案更为可取.
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CD34+HPC来源的树突状细胞体外扩增和功能研究
目的研究脐血CD34+HPC体外扩增诱导产生功能性树突状细胞(DCs) 的有效方案.方法 Ficoll分离脐血获得单个核细胞,免疫磁珠阳性分选CD34+HPC,3H-TdR检测DCs激发异体T细胞增殖的能力,MTT法检测特异性CTL的杀伤能力.结果 SCF+FL+GM-CSF+IL-4诱导生成的DCs激发T细胞增殖和特异性CTL的杀伤能力均高于其他组.结论 SCF+FL+GM-CSF+IL-4可有效扩增CD34+HPC并诱导产生功能性DCs.
