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PPA1文献资料
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小鼠PPA1重组腺病毒的构建及在胰岛β细胞中的表达
目的:构建小鼠PPA1重组腺病毒,观察重组腺病毒在小鼠胰岛和β-TC6细胞中的表达,以及对脂肪酸引起的胰岛β细胞凋亡的影响.方法:将目的基因PPA1插入到腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV中,质粒经PCR鉴定正确后用PmeⅠ酶切线性化,转到含有腺病毒骨架pAdeasy-1的BJ5183细菌中进行同源重组,重组成功的质粒经PacⅠ酶切线性化后转染QBI-293A细胞,经包装得到Ad-PPA1腺病毒.根据绿色荧光蛋白(GFP)检测病毒滴度和感染效率.用病毒感染小鼠胰岛和β-TC6细胞,以Western blot法检测PPA1蛋白表达水平.Hoechst染色法检测PPA1对细胞凋亡的影响.结果:重组腺病毒载体pAdeasy-PPA1经酶切鉴定确认构建成功,将pAdeasy-PPA1转染QBI-293A细胞,观察细胞病变效应提示病毒成功包装.重组腺病毒能够有效感染小鼠胰岛和β-TC6细胞并成功过表达PPA1蛋白.Hoechst染色结果表明过表达PPA1可保护脂肪酸引起的胰岛β细胞凋亡.结论:成功构建携带小鼠PPA1基因的重组腺病毒,并证实过表达PPA1具有抗凋亡的作用,为进一步研究PPA1在胰岛β细胞中的功能奠定了基础.
