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MicroRNA-199a-3p对人骨肉瘤细胞凋亡的影响
目的:探讨microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)对人骨肉瘤细胞凋亡的影响.方法:用合成的成熟miR-199a-3p序列模拟物(miR-199a-3p mimics)转染人骨肉瘤细胞(U2-OS),以阴性对照物序列(NC mimics)转染细胞作为阴性对照.转染后应用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞miR-199a-3p的表达量,Western blot法检测各组细胞中髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白的表达水平及多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的剪切情况,利用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,并对实验结果进行统计学分析.结果:与对照组相比,转染miR-199a-3p mimics的实验组细胞中,miR-199a-3p的表达量明显升高,MCL-1蛋白的表达降低,PARP蛋白的剪切水平增加,细胞的凋亡率增高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:miR-199a-3p可以有效促进骨肉瘤细胞的凋亡.
关键词： 骨肉瘤 凋亡 microRNA-199a-3p 转染 -
MicroRNA-199a-3p在肾癌中的表达及作用
目的 检测microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)在肾癌细胞株和组织中的表达情况并探究miR-199a-3p在肾癌细胞中的作用.方法 利用实时定量RT-PCR检测miR-199a-3p在肾癌细胞和组织中的表达水平;利用miR-199a-3p模拟物转染肾癌细胞786-0上调miR-199a-3p后,通过CCK-8、克隆形成、Transwell以及细胞周期检测来探究其在肾癌细胞中的作用.结果 miR-199a-3p在肾癌细胞中明显低表达,在78%(14/18)的肾癌组织中亦明显低表达;上调miR-199a-3p可显著抑制肾癌细胞的增殖、存活和侵袭并能诱导细胞周期G1期阻滞.结论 我们的研究显示在肾癌中miR-199a-3p明显低表达并参与肾癌的发生、发展,这表明miR-199a-3p具有作为肾癌诊断和治疗靶点的潜能.
关键词： microRNA-199a-3p 抑癌基因 肾细胞癌 -
miR-199a-3p靶向视网膜母细胞瘤转录辅阻遏子1促进心肌细胞肥大
[目的]探讨微小RNA microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)对心肌细胞肥大的调控作用及其作用靶基因.[方法]原代分离培养C57BL/6乳小鼠心肌细胞(NMVC),转染miR-199a-3p模拟物(mimic)和视网膜母细胞瘤转录辅阻遏子1(Rb-1)siRNA分别来增加NMVC中miR-199a-3p和抑制Rb-1的水平.双荧光素酶报告基因实验检测miR-199a-3p与潜在靶基因Rb-1 3'端非翻译区(3'-UTR)的结合作用.FITC-鬼笔环肽染色检测乳小鼠心肌细胞表面积.RT-qPCR和Western blot检测miR-199a-3p,Rb-1和心肌细胞肥大相关基因的表达.[结果]①过表达miR-199a-3p可明显增加NMVC中的肥厚相关基因Nppa,Acta1,Myh7表达;②双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-199a-3p与Rb-1 3'UTR具有特异结合作用;miR-199a-3p可在转录后水平抑制Rb-1的表达;③过表达miR-199a-3p或抑制Rb-1表达均能一致性地增加心肌细胞表面积和心肌细胞肥大相关基因表达,并促进E2f2进入NMVC细胞核.[结论]miR-199a-3p通过抑制Rb-1表达,促进了E2f2进入细胞核来发挥促进NMVC肥大的作用.
