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牛膝多肽可能通过ERK1/2途径诱导PC12细胞向神经元分化
目的:研究牛膝多肽(ABPP)诱导PC12细胞向神经元分化的作用,初步探讨ABPP作用于PC12细胞的信号转导途径.方法:以体外培养的PC12细胞为研究模型,观察在低血清的情况下不同浓度ABPP(0.25、0.50、1.00 μg/ml)诱导PC12细胞发生的形态学改变.采用免疫荧光细胞化学法,观察神经丝蛋白(NF-H)在ABPP诱导分化的PC12细胞中的表达;采用Western blot法观察ABPP(1.0 μg/ml)加药后不同时间段(0、6、12h和1、2、3、7d)和不同浓度ABPP(0.25、0.50、1.00 μg/ml)加药2d后对PC12细胞ERK 1/2活性的影响,同时应用ERK1/2特异性拮抗剂PD98059与ABPP共培养PC12细胞,分析ABPP对PC12细胞的作用与ERK1/2通路的关系.结果:ABPP处理3d后,部分PC12细胞开始出现神经元样的形态.随着加药时间延长具有神经元样的细胞逐渐增多,到7d时,可以见到神经生长因子(NGF)和ABPP处理组PC12细胞的突起都显著增多,能形成网络;14 d时,这种现象愈发显著.加药后7d和14d,ABPP各浓度组的细胞分化率以及细胞突起长度均明显提高,且存在明显的剂量反应关系.加药第7天和第14天,ABPP高剂量组与NGF组的PC12细胞均出现NF-H标记阳性的分化细胞.ABPP对ERK1/2的激活作用存在明显的量效关系,以1.0 μg/ml作用2d为大.当用PD98059抑制ERK1/2的活化时,ABPP对ERK1/2的激活作用被部分阻断.结论:ABPP具有诱导PC12细胞神经元性分化的作用,此作用可能是通过ERK1/2信号转导途径实现的.
