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沉默大鼠KAT7基因对亚溶解型C5b-9刺激GMC诱导趋化因子MCP-1生成的影响
目的:研究沉默大鼠赖氨酸乙酰基转移酶7(lysine acetyltransferase 7,KAT7)基因对亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cell,GMC)诱导单核趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-l,MCP-1)生成的影响.方法:针对KAT7基因不同位点,用DNA重组技术设计4个小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA),分别克隆到真核表达载体pGCsi-U6/Neo/GFP/shRNA中.之后,用NeonTM电转仪将上述质粒转染至体外培养的GMC中,再给予sublytic C5b-9刺激.行Western blot实验检查筛选出针对KAT7基因且有佳沉默效率的shRNA.此外,用real-time PCR和ELISA法分别检测GMC行不同分组处理后MCP-1的mRNA和蛋白水平.结果:核酸测序表明,重组的shKAT7质粒构建成功.Western blot显示,shKAT7-2是具备佳沉默效率的shRNA.用shKAT7转染GMC后,由sublytic C5b-9刺激GMC诱导的MCP-1基因表达水平显著下降.结论:成功构建了大鼠KAT7 shRNA真核表达质粒,并初步证实KAT7基因的表达能够促进sublytic C5b-9刺激大鼠GMC诱导趋化因子MCP-1的合成与分泌.
