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Alu RNA文献资料
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Alu RNA及其突变体真核表达质粒构建以及对A549细胞活性氧簇产生的影响
目的:从氧化应激的A549细胞鉴定Alu RNA表达,构建Alu RNA及其2种功能缺失突变体的真核表达质粒,探讨过表达Alu RNA及其突变体对细胞氧化应激的影响.方法:设计Alu RNA特异性引物,H2O2应激A549细胞,RT-PCR扩增目的片段,通过定向克隆、点突变等方法构建pc DNA3.0-Alu(p Alu)重组质粒、右臂缺失突变体pc DNA3.0-Alu-left arm(p Alu-LA)、G25C突变体pc DNA3.0-Alu G25C(p Alu-M);转染A549细胞,DCFH-DA检测活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)产生水平.结果:从应激的A549细胞成功扩增了Alu分子,重组的真核表达质粒p Alu、p Alu-LA、p Alu-M经酶切及DNA测序鉴定符合预期;p Alu、p Alu-LA转染显著促进A549细胞ROS产生;与p Alu相比,p Alu-M转染诱导产生的ROS显著降低.结论:成功克隆了氧化应激刺激下A549细胞产生的Alu RNA及其2种功能缺失突变体的真核表达质粒,体外实验显示Alu RNA通过翻译水平调控促进A549细胞ROS产生.
