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烟碱型乙酰胆碱受体激动剂GTS-21对鼠实验性结肠炎的影响
目的:通过建立葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的鼠结肠炎模型,探讨alpha7烟碱型乙酰胆碱受体(alpha7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)激动剂GTS-21改善模型鼠结肠炎症的效果及可能机制.方法:8～10周龄SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照(CON)组、DSS模型组、GTS-21治疗组(每组8只).DSS模型组采用自由饮用含3.5％DSS水造模,治疗组自由饮用3.5％DSS水,同时给予GTS-21[10m~(kg·d),腹腔注射],共7d,对照组予生理盐水,每天予各组鼠疾病活动性评分(DAI评分).第8天处死小鼠,观察结肠黏膜组织大体改变并测其长度、湿重,HE染色后行肠组织学炎症(HI)评分;细胞因子芯片筛选变化的细胞因子;ELISA法进一步检测芯片筛选出的变化明显的细胞因子.结果:①DSS组鼠结肠长度变短[(8.22± 0.37)cm vs.(11.65±0.30)cm,n=8,P＜0.001],DAI评分较正常组增高[(1.51±0.10)分vs.0分,n=8,P＜0.001],HI评分升高[(20.5±3.9)分vs.(0.9±0.4)分,n=8,P＜0.001],表明造模成功;②给予烟碱型乙酰胆碱受体激动剂GTS-21的DSS模型鼠,DAI评分下降[(0.25±0.10)分vs.(1.51±0.10)分,n=8,P＜0.001];结肠长度较DSS组改善[(9.42±0.32)cm vs.(8.22± 0.37)cm,n=8,P＜0.05];HI评分减低[(7.5±2.0)分vs(20.5± 3.9)分,n=8,P＜0.01],提示GTS-21能改善DSS诱导的鼠结肠炎症;③细胞因子芯片筛选实验结果表明,DSS组γ干扰素诱导单核细胞因子(monokine induced by IFN-γ,CXCL9/Mig)升高明显,此外肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、γ-干扰素(interferon γ,IFN-γ)也明显升高;④进一步ELISA检测芯片变化明显的CXCL9/Mig,发现DSS组鼠血清CXCL9/Mig明显升高(P＜0.05),给予GTS-21后,血清CXCL9/Mig降低(P＜0.05).结论:GTS-21能减轻实验结肠炎鼠肠道炎症,该作用可能与减低趋化因子CXCL9/Mig水平,进而减少炎症细胞的肠道聚集有关.
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alpha7烟碱型乙酰胆碱受体对脂肪细胞促酰化蛋白的表达及机制
目的 探讨alpha7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)对乳糜微粒(CM)介导的脂肪细胞促酰化蛋白(ASP)表达及其机制.方法 诱导培养3T3-L1前脂肪细胞分化成熟;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定ASP和其前体补体C3(C3)表达;Western blot法测定p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)及磷酸化p38(p-p38)表达;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测ASP受体C5L2表达.结果 烟碱(1.0×10-9、1.0×10-8、1.0×10-7 mol/L)呈浓度依赖性抑制CM(200 μg TG/ml,24 h)介导的C3和ASP表达上调(P＜0.05),α7nAChR特异性阻断剂α-银环蛇神经毒素(α-BTX)拮抗烟碱(10-8mol/L)介导这一效应[ASP (pmol/mg cell protein):0.81±0.35比0.71 ±0.22,P＜0.05;C3(pmol/mg cell protein):16.37±1.64比12.75±0.88,P＜0.05];α7nAChR抑制CM介导的p-p38上调(1.65 ±0.11比2.18±0.23,P＜0.05),p38特异性抑制剂SB203580预处理组p-p38及C3较CM处理组明显降低[C3 (pmol/mg cell protein):14.72±1.31比19.34±1.49,P＜0.05和p-p38:1.59 ±0.26比2.09±0.32,P＜0.05];α7nAChR抑制CM介导的C5L2 mRNA表达下调(0.56±0.08比0.44±0.14,P＜0.05).结论 α7nAChR通过下调C3及恢复C5L2表达进而抑制CM介导脂肪细胞的ASP表达上调,p38信号通路参与调控C3的表达.
