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日本血吸虫22.6kDa重组蛋白对小鼠的免疫保护性研究
目的研究日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa抗原作为血吸虫病疫苗候选分子的潜能,并探讨Sj22.6/Sj26 GST融合蛋白作为复合疫苗的可能性.方法用亲和层析法制备Sj22.6/Sj26 GST融合蛋白.将这两种蛋白分别免疫BALB/c小鼠后进行攻击感染试验.结果 Sj22.6重组蛋白和Sj22.6/Sj26 GST融合蛋白分别可诱导小鼠产生32.1%(P<0.005)和34.9%(P<0.02)的成虫减虫率,28.4%(P<0.02)和45.1%(P<0.005)的总减卵率.结论 Sj22.6与Sj22.6/Sj26GST融合蛋白均有疫苗应用价值.
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我国弓形虫病核酸疫苗研究概况
刚地弓形虫(简称弓形虫)呈世界性分布,哺乳动物及鸟类普遍易感.人类对弓形虫有较强的自然免疫力,感染后绝大多数无明显症状表现,或只出现亚急性弓形虫病.但在孕妇及免疫功能低下者(如ADIS病、器官或组织移植后接受免疫抑制剂治疗的病人等)感染弓形虫后引起的危害严重.人体弓形虫感染日益受到关注,弓形虫病疫苗成为当前研究的热点.动物实验发现,弓形虫全虫疫苗,弓形虫特异抗原组分疫苗有预防弓形虫感染或降低感染度作用,但前者可能会引起再感染,后者的免疫保护效果较差.弓形虫病核酸疫苗克服了上述疫苗存在的不足,具有良好的开发应用前景.我国从上世纪90年代后期开始了弓形虫病核酸疫苗的研制,通过对表达保护性抗原蛋白基因进行重组,先后研制出弓形虫基因单价疫苗、复合疫苗和混合疫苗.动物实验证明部分疫苗具有良好的免疫预防效果.
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基于PSCA的肽-DNA复合疫苗的构建及其免疫学效应的检测
目的 设计、制备和鉴定PLL-PSCA 14-22/-pcDNA3.1 (+)-PSCA复合疫苗及其免疫学效应的检测.方法 将带正电荷的多聚赖氨酸(PLL)通过化学方法与PSCA的一个CTL表位肽PSCA14-22偶联,将上述阳离子多肽PLL-PSCA 14-22与带负电荷的编码PSCA的重组质粒pcDNA3.1 (+)-PSCA利用正负电荷相吸作用制备靶向PSCA的肽-DNA复合疫苗;通过DNA阻滞实验和DNase Ⅰ保护实验鉴定制备的疫苗;将制备成功的复合疫苗体外转染Hela细胞,通过RT-PCR检测该疫苗的转染效率;并进一步通过LDH释放实验检测该疫苗对PSCA阳性的前列腺癌细胞系LNCaP的特异性杀伤效应.结果 当PLL-PSCA 14-22多肽与pcDNA3.1 (+)-PSCA重组质粒正负电荷比≥2时,DNA电泳条带完全消失,即重组质粒pcDNA3.1 (+)-PSCA完全被PLL-PSCA14-22多肽所包裹,复合疫苗可有效抵抗DNase Ⅰ的消化作用.RT-PCR结果表明该复合疫苗在体外可有效转染Hela细胞,且当正负电荷比为64时出现较高的转染效率,并且能够有效激发CTL应答杀伤LNCaP细胞.结论 成功构建的靶向PSCA的多肽-DNA复合疫苗可有效转染真核细胞,诱导CTL应答杀伤前列腺癌细胞,该研究为进一步体内动物实验探讨该疫苗对前列腺癌的免疫治疗效应奠定了基础.