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抗病毒治疗后慢性乙肝患者HBVcccDNA检测临床价值分析
目的:探讨抗病毒治疗的慢性乙型肝病患者外周血白细胞中HBVcccDNA (covalently closed circular DNA)检测的临床价值.方法:采用MEIA法、PCR-微流芯片法检测25例抗病毒治疗的慢性肝病患者和与之匹配的65例未抗病毒治疗慢性肝病患者、3例非乙型肝炎患者血清HBVM、HBVDNA、外周血白细胞中HBVcccDNA.结果:3例非乙型肝炎患者HBVM、HBVDNA、HBVcccDNA均阴性;43.3%(39/90)的慢性肝病患者HBVcccDNA阳性;抗病毒治疗的慢性肝病患者HBVcccDNA阳性率(20.0%)显著低于未抗病毒治疗者(52.3%)(P<0.01).尤其在HBVDNA<103copy/ml的慢性肝病患者中(P<0.05).无论HBeAg+/HBeAb-还是HBeAg-/HBeAb+,抗病毒治疗者HBVcccDNA阳性率均显著低于未抗病毒治疗者(P<0.01、P<0.05).结论:慢性乙型肝病患者外周血白细胞中有较大比例HBVcccDNA阳性检出率.与血清HBVDNA、HBVM联合检测能提高抗病毒治疗效果判断的准确性.
关键词： 慢性乙型肝炎 HBV共价闭合环状DNA 抗病毒 -
慢性乙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞HBVcccDNA检测的临床意义
目的 了解慢性乙型肝炎患者血清及外周血单个核细胞内是否存在HBV共价闭合环状DNA.方法 以20例HBV携带者、75例慢性乙型肝炎和8例肝移植术后患者分离PBMC,应用增效PCR法检测HBVcccDNA.结果 本次未在PBMC中检测到HBVcccDNA;20例HBV携带者血清HBVcccDNA阳性率为10%,75例慢性肝炎轻、中、重度患者分别为32%、52%和76%,肝移植患者为12.5%(P<0.01);按血清HBV DNA载量不同分为<1×105 copies/ml、1×105～108 copies/ml和>1×108 copies/ml三组,其血清HBVeecDNA阳性率分别为15.4%(2/13)、50.0%(16/32)和76.7%(23/30,P<0.01).结论 慢性乙型肝炎患者肝外HBVcccDNA的检测还需要进一步研究.
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乙型肝炎病毒感染相关性肝癌中HBV cccDNA水平与突变关系的研究
目的:研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染相关性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中HBV共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)水平与突变关系.方法:运用特异性荧光定量PCR定量分析了12例肝癌组织和癌旁组织中乙肝病毒复制水平的表征因子HBV cccDNA,HBV total DNA及前基因组RNA (pregenome RNA,pgRNA)的表达水平,再用滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)特异性扩增癌组织中HBVcccDNA,测序分析了病毒基因组4个编码调控区域preC/C、RT、X、preS中cccDNA序列的突变.后检测了肿瘤组织cccDNA的AP位点.结果:HBVcccDNA在癌组织的表达水平明显低于癌旁组织(3.32 copies/cell vs.9.64 copies/cell,P=0.029),但是HBV总DNA和pgRNA的表达没有明显差异(16.94 copies/cell vs.12.18 copies/cell,P=0.325,75.54 copies/cell vs.22.46 copies/cell,P=0.128);在肝癌组织中,HBV cccDNApreC/C和X区间,G-A突变是主要的突变类型;其次,preC/C和X区域发生G-A突变的位置上,均更倾向于GA二联核苷酸组合方式,在肝癌中所占比例为37.1％和40％.后,肿瘤组织中APE1酶处理后,HBV cccDNA水平明显下降(1011 copies/μlvs.501.8 copies/μl,P=0.058).结论:HBV cccDNA水平在癌组织中明显低于癌旁组织,可能与癌组织中HBV cccDNA发生大量GA突变及形成的AP位点有关.
关键词： 乙型肝炎病毒 肝癌 HBV共价闭合环状DNA 序列突变
