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基因1b型HCV及其不同准种核心蛋白对TRAIL诱导凋亡通路中FADD及Bid表达的影响
目的 研究基因1b型丙肝病毒(HCV)标准株C191(HCV-J6)及其不同准种病毒株:癌中心组织株(tumor tissue,T)、癌旁组织株(non-tumor tissue,NT)编码的核心蛋白(core protein,CP)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导Huh-7细胞凋亡的影响,比较凋亡通路中关键分子FADD、Bid表达水平的差异.方法 用质粒pEGFP-N1及含HCV CP基因的真核表达质粒pEGFP-N1-C191、pEGFP-N1-NT、pEGFP-N1-T瞬时转染Huh-7细胞24 h,Western blot检测CP的表达.质粒转染24 h后,100 μg/L TRAIL处理细胞24h,CCK8检测细胞增殖率;Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR检测FADD、Bid mRNA表达水平;Western blot检测FADD、Bid蛋白表达水平.结果 HCV CP在细胞中高效表达.TRAIL诱导下各组细胞增殖率如下:T组(34.75±3.16)％、NT组(60.24±6.63)％、C191组(66.88±3.77)％、pEGFP-N1组(96.77±2.83)％,其中T、NT、C191组增殖率均低于pEGFP-N1组(P＜0.05),T组低于NT、C191组(P＜0.05).T、NT、C191组细胞凋亡率均高于pEGFP-N1组(P＜0.05),T组高于NT、C191组(P＜0.05),NT和C191组间差异无统计学意义(P＞0.05),pEGFP-N1和Huh-7组间差异无统计学意义(P＞0.05).FADD mRNA和蛋白表达水平:T组＞ NT、C191组＞pEGFP-N1、Huh-7组(P＜0.05).Bid mRNA和蛋白表达水平:T组＞NT、C191组＞pEGFP-N1、Huh-7组(P＜0.05).结论 HCV CP能从mRNA和蛋白水平提高细胞FADD和Bid表达,增强TRAIL诱导Huh-7细胞的凋亡.与准种NT和HCV标准株相比,准种T编码的CP能更明显上调FADD和Bid的表达水平,显著增强Huh-7细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性.
