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TAT-GluR6-9C与pMON原核表达载体重组体的构建
目的 表达和纯化TAT-GluR6-9C小肽,用于脑缺血细胞信号转导的研究.方法 用化学合成的方法 获得TAT-GluR6-9C小肽的cDNA;与原核表达载体pMON用T4 DNA连接酶连接;连接产物转化大肠杆菌JM109进行筛选、序列测定.结果 ①经化学合成并退火得到了TAT-GluR6-9C的双链cDNA;②酶切鉴定能观察到TAT-GluR6-9C和pMON两条带;③TAT-GluR6-9C测序图谱与GenBank报道完全一致.结论 获得了含目的 基因TAT-GluR6-9C的pMON原核表达载体重组体.
关键词: TAT-GluR6-9C pMON原核表达载体 序列测定 -
Tat-GluR6-9c抑制MLK3-MKK7-JNK信号通路对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元的保护作用
目的 探讨小肽Tat-GluR6-9c对混合性的谱系激酶3(MLK3)、丝裂原活化的蛋白激酶激酶7(MKK7)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平及蛋白表达的影响,以及对海马CA1区神经元损伤的影响. 方法 采用4-血管阻塞方法建立大鼠全脑缺血模型,应用免疫印迹的方法分别检测小肽Tat-GluR6-9c对缺血再灌注6h时MLK3、缺血再灌注3d时JNK的磷酸化及蛋白表达水平的影响;采用免疫印迹、免疫组织化学的方法检测小肽Tat-GluR6-9c对缺血再灌注1d时MKK7的磷酸化及蛋白表达水平的影响;采用焦油紫染色方法检测缺血再灌注5d时小肽Tat-GluR6-9c对大鼠海马CA1区神经元损伤的影响. 结果 Tat-GluR6-9c组MLK3、MKK7及JNK磷酸化水平显著低于缺血再灌注组及对照肽组,海马CA1区神经元存活的数量明显多于缺血再灌注组及对照肽组,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 小肽Tat-GluR6-9c能显著抑制脑缺血再灌注诱导的MLK3、MKK7及JNK的磷酸化高峰,降低海马CA1区神经元的损伤.