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聚乙二醇修饰尿酸酶的研究
目的:为了降低尿酸酶的免疫原性并提高其稳定性,利用PEG修饰荆对尿酸酶进行修饰,以期获得性质更优的治疗痛风的药物.方法:用相对分子质量为40kD,活化基团为羟基琥珀酰亚胺的PEG修饰剂对尿酸酶进行修饰,并比较修饰前后在酶解稳定性、pH稳定性及温度稳定性方面的差异,以及PEG修饰对体内半衰期,免疫原性的影响.结果:发现PEG修饰后尿酸酶的酶解稳定性显著提高,PEG化尿酸酶保留了原有尿酸酶80%的活性,体内半衰期从45min延长至696min.PEG化尿酸酶与抗体的结合能力为原型蛋白的1/8.体内的免疫原性也明显降低.结论:化学修饰后的尿酸酶可望成为潜在的治疗痛风的有效药物.
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RP-HPLC法检测CN10蛋白的PEG化修饰率及含量
目的 建立一种简单有效的测定CN10蛋白PEG化修饰率的方法,用于PEG化修饰工艺中的质量控制.方法 采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,以TSKgel Octadecyl-4PW作为色谱分离柱,以含0.12％三氟乙酸(TFA)、5％乙腈的水溶液作为A相溶液,以含0.1％TFA的乙腈作为B相溶液,在50℃柱温条件采用分段线性洗脱的方式分离蛋白,并考察CN10蛋白以及PEG化修饰后CN10蛋白的量效关系,根据外标法检测CN10和CN10-PEG的蛋白含量,根据PEG化修饰前后CN10蛋白量效关系的变化推断CN10蛋白的PEG化修饰率.结果 PEG化修饰前后的CN10蛋白经TSKgel Octadecyl-4PW色谱柱层析均能达基线分离,当用214 nm波长检测时,CN10蛋白浓度以及PEG修饰后的CN10蛋白均与其对应峰面积呈现良好的线性关系(r2=0.999 58;r2=0.999 67).结论 建立了一种简单快速的检测CN10蛋白PEG化修饰率的方法,此方法具有较高的准确性及专属性,可用于CN10的PEG化修饰工艺的监测.
