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嗜肺军团菌感染不同时间血清IL-12浓度的变化
目的 探讨嗜肺军团菌感染对机体血清白细胞介素(IL)12水平及免疫功能的影响.方法 BalB/C小鼠,实验组(又分1、2、3、4周组,n=15,各周第3天时间点观察),腹腔内注射含有嗜肺军团菌菌液0.2 ml(1×104/ml),对照组(n=15),腹腔内注射无菌生理盐水0.2 ml.分别在感染第1～4周内的相应时间点,采集小鼠血清,用酶联免疫吸附法(ELlSA)观察血清IL-12水平的动态变化.结果 感染嗜肺军团菌后第1、2、3和4周内的第3天BalB/C小鼠血清IL-12水平分别为(16.16±3.18)、(15.48±3.22)、(16.96±3.43)和(18.12±3.41)μg/ml;对照组相应时间点血清IL.12水平分别为(19.01±3.49)、(19.17±3.95),(19.58±3.64)和(18.86±3.32)μg/ml;实验组与对照组比,第1～3周差异有统计学意义(P＜0.05),而第4周差异无统计学意义(P＞0.05);嗜肺军团菌感染后前2周血清IL-12水平下降,第2周达到低,第3周有上升趋势,第4周基本恢复到正常水平.结论 嗜肺军团菌感染后对机体免疫功能早期下降,后期逐渐恢复.
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9L-rIL12-TK大鼠胶质瘤基因免疫疫苗的安全可控性体内实验研究
目的 评估9L-rIL12-TK脑胶质瘤基因免疫活细胞疫苗在体内的安全可控性.方法 将40只裸鼠随机分成3组,分别于右侧腋部皮下接种9L-rIL12-TK细胞(n=14)、9L-TK细胞(n=14)和9L细胞(n=12),7 d后将各组裸鼠分成两、匝组,实验组(n=8,8,6)给予更昔洛韦(GCV)干预实验,对照组(均n=6)给予生理盐水注射,连续7 d;观察裸鼠瘤体生长情况和生存时间,60 d后取瘤结节及全身脏器行组织学检查(苏木精-伊红染色).结果 [1]给予GCV干预后7 d,9L-rIL12-TK实验组及9L-TK实验组裸鼠瘤体平均体积较相应对照组及9L组显著性缩小(均JP＜0.05).60 d时,8只9L-rIL12-TK实验组裸鼠瘤体均完全消退,且均无复发;8只9L-TK实验组裸鼠中,瘤体完全消退3只,瘤体缩小后再次增大5只;余亚组瘤体均呈增大趋势.[2]GCV干预后.9L-rIL12-TK实验组和9L-TK实验组与相应对照组比较,生存时间明显延长(P＜0.05).[3]9L-rIL12-TK实验组和9L-TK实验组无瘤裸鼠接种部位无异型性肿瘤细胞,余裸鼠瘤体内均见异型性肿瘤细胞;所有裸鼠相关脏器病理学检查均未见肿瘤远处转移征象.结论 9L-rIL12-TK大鼠胶质瘤细胞基因免疫疫苗在裸鼠体内可得到安全有效的控制,使制备免疫原性强且安全有效的胶质瘤基因免疫活细胞疫苗策略成为可能;其基因免疫治疗效应有待进一步研究.
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白细胞介素12基因修饰大鼠胶质瘤9L/rIL-12细胞的建立
目的 构建大鼠白细胞介素12(rIL-12)基因真核表达载体质粒,建立rIL-12基因修饰并稳定表达的大鼠胶质瘤9L/rIL-12细胞.方法 用Trizol提取大鼠腹腔巨噬细胞总RNA,RT-PCR方法分别获取rp40和rp35 cDNA,依次克隆人pcDNA3.1(-)/mycHis A质粒中,以IRES连接双亚基,构建成双顺反子真核表达载体质粒pcDNA3.1/rIL-12.将构建的重组质粒转染大鼠胶质瘤9L细胞,G418筛选单克隆细胞株,ELISA法检测其培养上清rIL-12(p70)蛋白含量,同时抽提细胞RNA,RT-pCR方法检测rp40、rp35基因在9L/rIL-12细胞中的表达.结果 所得rp40cDNA序列与Gene Bank NM022611及AF133197、rp35cDNA序列与Gene Bank NM053390及AF177031均一致,构建的质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确.质粒转染9L细胞后,获得2个rIL-12基因稳定、高效表达的9L/rIL-12单克隆细胞株,其培养上清rIL-12(p70)蛋白含量分别为139.0、162.1 pg/ml,RT-PCR结果显示细胞中rIL-12基因表达呈阳性.结论 成功构建了rIL-12真核表达质粒pcDNA3.1/rIL-12,并建立了9L/rIL-12细胞株,为rIL-12基因修饰的胶质瘤疫苗研究打下了基础.
