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POZ区文献资料
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原癌基因Zbtb7A的POZ区在大肠杆菌中的表达及其多抗制备
目的:原癌基因Zbtb7A在肿瘤的发生发展过程中起"分子开关"的作用.本研究制备Zbtb7A蛋白POZ功能区重组蛋白及相应的多克隆抗体. 方法:根据大肠杆菌的密码子偏好性,优化其编码序列,用2步法PCR合成目的片断,并将其构建入原核表达载体pET-26b(+)中.重组表达质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),用0.5mmol IPTG诱导重组蛋白表达.所获重组表达蛋白经15%SDS-PAGE分离,切胶回收目的蛋白,研磨后免疫家兔制备抗血清.收集的抗血清经饱和硫酸铵沉淀和G蛋白柱联合纯化,用Western blot证实对纯化的抗血清进行鉴定.结果:获得了密码子优化后的Zbtb7A POZ区的编码序列,并成功地获得了其重组蛋白,制备了高纯度的抗POZ区多克隆抗体. 结论:所获得的重组POZ区蛋白及其多克隆抗体可应用于对Zbtb7A的进一步研究.
关键词： 原癌基因Zbtb7A POZ区 pET-26b(+) 原核表达 多克隆抗体
