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缺失激素结合区的人糖皮质激素受体突变体的研究
目的:构建缺失激素结合区(LBD)的人糖皮质激素受体突变体表达载体,并研究其表达和功能.方法:运用RT-nested PCR扩增人糖皮质激素受体(GR)基因不含编码LBD的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选编码正确的重组质粒;荧光显微镜观察GR突变体重组质粒转染人巨噬细胞株U937后的表达情况;相对荧光素酶法检测转染后细胞GR转录激活活性.结果:扩增出长1601 bp的cDNA序列,测序证实:克隆片段与Genebank该基因序列同源性为100%;重组质粒表达产物定位于细胞核;转染组细胞GR转录激活活性增强.结论:成功构建缺失LBD的GR突变体表达载体,该突变体具有不依赖激素的GR转录激活活性.
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人糖皮质激素受体变异体cDNA序列克隆和表达及其活性研究
目的构建人糖皮质激素受体变异体表达载体,研究其表达和功能.方法运用RT-nested PCR扩增糖皮质激素受体不含有编码LBD(ligand binding domain)的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选重组质粒;荧光显微镜观察重组质粒转染表达情况;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性.结果扩增出长1 601 bp的cDNA序列,测序证实:克隆片段与Genbank该基因序列同源性为100%;重组质粒表达产物定位于细胞核;转染组细胞转录激活活性增强.结论成功构建糖皮质激素受体变异体的表达载体,该变异体具有不依赖激素的转录激活活性.
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一氧化氮调节脂多糖致炎大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体功能的研究
目的研究肺泡巨噬细胞在脂多糖(LPS)作用条件下一氧化氮供体(SNP)对糖皮质激素受体(GR)功能的调节作用.方法将GR荧光表达质粒pGFP-GR转染大鼠肺泡巨噬细胞,经LPS和SNP作用后,荧光显微镜观察质粒表达产物GFP-GR核移位情况;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性;EMSA检测检测细胞NF-κB活性.结果 500 μmol/L SNP作用2 h出现GFP-GR核移位,同时GR转录激活活性显著增强,NF-κB活性被显著抑制.运用GR特异性拮抗剂RU486后,NF-κB活性抑制现象消失.结论肺泡巨噬细胞在致炎因子作用条件下,一氧化氮供体(500 μmol/L SNP )通过活化GR发挥抗炎活性.
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大鼠糖皮质激素受体变异体cDNA序列克隆和表达及功能研究
目的:构建大鼠糖皮质激素受体变异体表达载体,研究其表达和功能.方法:运用RT- nested PCR扩增糖皮质激素受体不含有编码LBD结构域的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选重组质粒;荧光显微镜观察重组质粒转染后的表达情况;相对荧光素酶法检测转录激活活性.结果:扩增出长1 612 bp的cDNA序列,测序证实:克隆片段与Genebank该基因序列同源性为100%;重组质粒表达产物定位于细胞核;转染组细胞转录激活活性增强.结论:成功构建糖皮质激素受体变异体的表达载体,该变异体具有不依赖激素的转录激活活性.
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NF-kB在神经元变性中的作用
细胞核因子kB(Nuclear Factor-kB,NF-kB)是1986年由Sen和Baitirmore首先描述,是一种B细胞核因子,可与免疫球蛋白的轻链(k链)增强子结合并具有结构性转录激活活性,故命名为细胞核因子或称k基因核因子.随着研究的进一步深入,发现NF-kB是一类普遍存在的细胞转录因子,在其它细胞中也有表达[1].它调控着编码细胞因子、生长因子、细胞粘附分子和一些在健康和疾病状态下的急性蛋白因子.
