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pGEX -2T文献资料
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人睾丸前列腺素D合成酶的原核表达
目的:将获得纯化的重组人睾丸前列腺素D合成酶(L -PGDS)用于基础和临床研究. 方法:在原核表达系统中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒pGEX -2T/htL -PGDS的表达,用谷胱甘肽琼脂糖珠亲和并纯化重组融合蛋白GST/htL -PGDS,再用凝血酶裂解融合蛋白,从而获得纯化的重组L -PGDS.对表达纯化重组蛋白的质粒进行DNA测序,并对重组蛋白进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS -PAGE)分析,鉴定其是否为所需目的蛋白. 结果:用IPTG诱导重组质粒pGEX -2T/htL -PGDS表达的佳浓度为1 mmol/L,佳时间为4 h.在此基础上获得的融合蛋白用凝血酶裂解后获得单一纯化的重组蛋白L -PGDS,佳裂解时间为2 h.SDS -PAGE和DNA测序证实,所获的重组蛋白确系所需目的蛋白. 结论:用上述方法可获得纯化的人睾丸L-PGDS.
