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5_氮杂_2’_脱氧胞苷对内皮祖细胞分化的影响及机制研究
目的：探讨5_氮杂_2’_脱氧胞苷诱导内皮祖细胞分化为内皮细胞的作用及初步机制研究。方法收集脐带血，Ficoll_Paque淋巴细胞分离液和6％羟乙基淀粉沉降法分离获得单核细胞并培养，采用免疫组化及倒置相差显微镜鉴定细胞为内皮祖细胞（EPCs），EPCs培养7d后，分别加入1μmol／L（即dC1组），3μmol／L（即dC2组）5_Aza_dC的培养液，阴性组为采用0.0076％ DMSO进行干预。流式细胞术检测5_Aza_dC处理后第0、3、7d后CD34＋、CD31＋的表达， RT_PCR分析VE_cadherin、Tie_2及vWF基因表达，western blotting检测vWF蛋白表达，MSP法检测BMP4基因CpG岛甲基化表达情况。结果①单核细胞经倒置相差显微镜及VE_cadherin、Tie_2、vWF、KDR、CD34及CD133等因子证实为EPCs；②流式细胞术结果显示，dC2组在经5_Aza_dC处理后的第3d、第7d CD34＋（分别为30.2％、6.7％）降低，同阴性组（46.7％、40.8％）比较差异具有统计学意义（均 P＜0.05）；dC2组在经5_Aza_dC处理后的第7d C CD31＋（47.9％）升高，同阴性组（31.3％）比较差异具有统计学意义（ P＜0.05）；③RT_PCR结果显示，dC2组在处理后第14d Tie_2、VE_cad-herin基因均明显高于阴性组（均 P＜0.05）；dC1、dC2组在处理后的第3d、第7d、第14d Tie_2、vWF、VE_cadherin基因均明显高于处理后的第0d（均 P＜0.05）；④Western blotting检测显示，dC2组第0d、第3d、第7d vWF蛋白表达量均高于阴性组（均 P＜0.05）；dC1、dC2组在第3d、第7d vWF蛋白表达量均高于所对应组别的第0d vWF蛋白表达量（均 P＜0.05）；⑤甲基化处理后dC1组和dC2组BMP4呈低表达，而非甲基化时dC1组和dC2组BMP4呈强表达。结论5_Aza_dC具有定向且快速诱导EPCs分化为内皮细胞的可能，这一作用机制可能与促进BMP4分化基因表达，进而刺激Tie_2、VE_cadherin及vWF的表达的作用有关。
关键词： 5_氮杂_2’_脱氧胞苷 内皮祖细胞 分化 内皮细胞
