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一个同时携带线粒体tRNAMet4435A＞G和YARS2 c.5750A＞C基因突变的原发性高血压家系的线粒体功能
目的:通过构建携带突变的永生化淋巴细胞系,探讨原发性高血压患者线粒体tRNAMet(以下简写为m.)4435A＞G基因突变和YARS2 c.5750A＞C基因突变对线粒体功能的影响.方法:根据临床表现、线粒体DNA全序列以及YARS2外显子测序结果,寻找并确定含有m.4435A＞G以及YARS2基因突变的先证者,并对其家系成员进行拓展筛查.采集确诊家系的外周静脉血标本,并将血液中的淋巴细胞转化为永生化类淋巴母细胞系,经过一段时间的培养后进行线粒体膜电位(MMP)测试和细胞内活性氧(ROS)检测,Northern blot印记杂交实验等一系列反映细胞功能的相关实验.结果:线粒体DNA全序列扩增检测确定含有m.4435A＞G以及YARS2基因突变的先证者和其家庭成员,进一步的种系发生学分析发现4435位点的保守性指数高达100%.成功建立永生化淋巴细胞系,tRNA稳态水平结果显示,携带m.4435A＞G突变的样本tRNAMet稳态水平明显降低,携带YARS2 c.5750A＞C突变样本的tRNATyr稳态水平亦明显降低,且双突变样本的tRNAMet降低量要多于单突变样本;与对照组相比,含有m.4435A＞G和YARS2 c.5750A＞C基因突变的细胞株其ROS水平均升高,且双突变的升高水平大于单突变,差异均有统计学意义(P＜0.05);m.4435A＞G和YARS2 c.5750A＞C基因突变细胞株中MMP降低水平明显大于对照组(P＜0.05).结论:m.4435A＞G和YARS2 c.5750A＞C突变分别引起tRNAMet和tRNATyr的代谢异常,造成线粒体翻译缺陷,ROS水平上升,MMP水平下降,并且核基因突变对线粒体突变具有加重作用,终导致细胞功能障碍.
