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亚慢性苯吸入暴露抑制小鼠单倍体精子核蛋白基因的表达
目的：探讨苯对小鼠精子生成损伤的主要阶段。方法：6～8周龄C57BL/6J雄性小鼠，按体质量随机分为3组，对照组、1 ppm和100 ppm苯暴露组，模拟职业暴露情况，实施每天8 h，每周5 d，共13周的亚慢性动式吸入染毒。HE染色观察睾丸组织病理学改变。选取精子发生中阶段特异性表达基因作为不同阶段精子的marker，选定的marker基因有代表未分化型精原细胞的Plzf，分化型精原细胞的Stra8，初级精母细胞的Sycp3，圆形精子的过渡蛋白Tnp1、Tnp2，长形精子的Akap4，以及鱼精蛋白Prm1、Prm2，采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测marker基因mRNA表达。结果：苯暴露组小鼠睾丸组织呈现嗜酸性染色增强，1 ppm 组出现少量核溶解、细胞脱落等改变；100 ppm组小鼠睾丸生殖细胞变性、坏死明显增多，管腔中心无（或少）细胞的曲细精管数量明显增多，表明亚慢性苯暴露可引起小鼠睾丸的病理改变。苯暴露组Plzf、Stra8、Sycp3、Akap4的mRNA表达均未显示统计学差别，而1 ppm组鱼精蛋白Prm2的mRNA表达显著降低（P＜0.01）；100 ppm组过渡蛋白Tnp1、Tnp2，鱼精蛋白Prm1、Prm2的mRNA表达均显著降低（P＜0.05）。结论：亚慢性苯吸入暴露可导致小鼠睾丸组织的病理改变，下调Tnps和Prms mRNA表达，主要影响单倍体精子细胞核内组蛋白被鱼精蛋白取代的过程。
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小鼠精母细胞在体外分化为精子细胞
目的:探讨未成熟小鼠生精细胞在体外培养条件下的分化情况.方法:用支持细胞(TM4)条件培养液培养出生后14 d的BALB/c小鼠睾丸细胞,对照组采用添加1%胎牛血清的MEM培养液维持细胞存活,在不同时段收获细胞,实时定量RT-PCR分析精子细胞特异性基因Tnp2表达的变化.结果:实时定量RT-PCR显示,在体内,Tnp2的表达随小鼠日龄增长而升高,与精子细胞发生过程同步;在睾丸细胞体外培养过程中,Tnp2的表达在TM4条件培养液培养d 5显著升高(P＜0.05),而对照组始终无变化.结论:在TM4条件培养液的作用下,小鼠精母细胞在体外分化为精子细胞.
