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重组登革病毒1-4型包膜蛋白EDIII的融合表达和免疫学特性研究
目的：构建含登革病毒（DENV）1-4型包膜蛋白（E蛋白）EDIII区的融合蛋白，并通过动物实验分析该融合蛋白的免疫机制。方法：通过生物信息学分析获得具有广泛代表性的DENV 1-4型EDIII区的氨基酸序列；将编码DENV 1-4型EDIII区的基因序列通过GS linker进行串联后插入原核表达载体pColdIII的多克隆位点，并将构建的重组质粒pColdIII-EDIII转化至大肠杆菌BL21（DE3）；通过SDS-PAGE及Western blot法鉴定目的蛋白表达，采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。将纯化的蛋白免疫BABL/c小鼠，初次免疫之后再加强免疫2次。通过ELISA法检测血清中的抗体效价和细胞因子的分泌情况来评价其免疫效应。结果：重组蛋白EDIII免疫小鼠后可以诱导产生高滴度的特异性抗体，抗体效价为1：40000。抗原刺激小鼠脾淋巴细胞可以诱导Th1和Th2细胞免疫应答。结论：成功表达了含DENV 1-4型E蛋白EDIII的融合蛋白，并通过动物实验证实该融合蛋白能诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答，为DENV四价重组疫苗的研制奠定了基础。
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融合免疫佐剂Lipo多肽与包膜蛋白EDⅢ区的登革病毒四价疫苗的构建及免疫效应研究
目的 构建编码免疫佐剂Lipo多肽与登革病毒1-4型包膜蛋白EDⅢ区的重组甲病毒载体,并在小鼠体内研究其免疫效应,为研制新型的登革病毒四价疫苗奠定基础.方法 先通过GS linker将编码免疫佐剂Lipo多肽的基因序列与编码登革病毒1-4型包膜蛋白EDⅢ区的基因序列进行串联获得LipoEDⅢ;然后将LipoEDⅢ基因插入甲病毒载体DREP的多克隆位点,构建重组甲病毒载体DREP-LipoEDⅢ;将DREP-LipoEDⅢ转染293细胞,Western blot检测融合蛋白的表达;随后将DREP LipoEDⅢ免疫ICR小鼠,不加任何佐剂,再加强免疫2次后,通过ELISA检测血清中的抗体效价和细胞因子的分泌情况来评价其免疫效应.结果 成功构建了含有“融合免疫佐剂Lipo多肽与包膜蛋白EDⅢ区”的重组甲病毒质粒DREP-LipoEDⅢ.DREP-LipoEDⅢ免疫小鼠后可以诱导产生特异性抗体,抗体效价为1∶160.抗原刺激小鼠脾淋巴细胞可以产生IFN r、IL 4、IL 10细胞因子,实验组的浓度明显高于对照组.结论 在不需要加入任何外源佐剂的情况下,本研究构建的融合免疫佐剂Lipo多肽的登革四价疫苗能够诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答,且以细胞免疫应答为主,为今后新型登革病毒四价疫苗的研究奠定了基础.
