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与肾小管上皮转分化相关的miRNA的初步筛选
目的：观察miRNA在大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）发生上皮-肌成纤维细胞转分化（EMT）过程中的变化，筛选与肾小管上皮细胞转分化相关的miRNA。方法体外培养NRK-52E，用5 ng/ml转化生长因子-β1（TGF-β1）分别作用0、3、6、12、24、48 h，以0 h为空白组（BC组），余为TGF-β1组。倒置相差显微镜观察细胞形态学变化；real- time PCR法检测细胞内α-平滑肌肌动蛋白（α- SMA）、E钙蛋白（E- cad）、1型胶原（ColⅠ）和纤连蛋白（FN）的 mRNA表达水平；Western blot法检测细胞内α- SMA的表达水平；ELISA法检测上清液中FN的含量；茎环实时荧光定量PCR法检测6条miRNA在细胞内的表达水平。结果与BC组比较，TGF-β1组部分细胞失去原有的鹅卵石形态，转变成成纤维细胞特有的梭形；细胞内α- SMA、ColⅠ和FN的mRNA表达上调，E- cad的mRNA表达下调，细胞内α- SMA表达量增多，细胞上清液中FN含量升高（均P＜0.05）；miR-30d、miR-132和miR-21的表达上调，miR-200b、miR-192和miR-10b的表达下调（均P＜0.05）。结论 TGF-β1可诱导NRK-52E发生EMT。miR-30d、miR-132、miR-21、miR-200b、miR-192和miR-10b可能参与大鼠肾小管上皮细胞EMT，值得进一步研究。
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TGF-β1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响研究
目的：探究TGF-β1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖的影响，进一步揭示哮喘的发病机制。方法建立大鼠慢性哮喘模型，原代分离培养大鼠ASMC，将细胞分为正常组、哮喘组、TGF-β1组和TGF-β1+PD-98059组，以CCK-8法检测细胞增殖，Western blot法检测caveolin-1和p- ERK1/2蛋白表达。结果 TGF-β1组细胞增殖较正常组和哮喘组明显（均P＜0.01）；TGF-β1+PD-98059组细胞增殖较TGF-β1组减低，但较哮喘组仍明显（均P＜0.05）。TGF-β1组p- ERK1/2表达量较正常组和哮喘组增加；TGF-β1+PD-98059组p- ERK1/2表达量较TGF-β1组减少，但较哮喘组表达量仍有所增加（均P＜0.05）。TGF-β1组caveolin-1表达量较正常组和哮喘组减少（均P＜0.05）；TGF-β1+PD-98059组caveolin-1表达量较TGF-β1组增加（P＜0.05）。结论 TGF-β1可以下调caveolin-1蛋白的表达量，激活ERK通路，从而促进哮喘大鼠ASMC的增殖，引起气道重塑。
关键词： 转化生长因子- β1 哮喘 气道平滑肌细胞 微囊蛋白- 1 ERK -
PDGF对哮喘大鼠气道平滑肌细胞中ERK通路的影响研究
目的：研究血小板源性生长因子（PDGF）对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）中ERK信号通路的调控作用。方法建立哮喘大鼠模型，原代分离培养ASMC，设未干预组（A组）、ERK阻断剂组（B组）、PDGF组（C组）和PDGF+ERK阻断剂组（D组）。A组不加干预；B组又分为B1、B2、B3、B4组，分别加入浓度为0.1、1、5、10μmol/L的ERK阻断剂U0126；C组又分为C1、C2、C3、C4组，分别加入浓度为1、10、25、50μg/L的PDGF同二聚体PDGF- BB；D组加入10μmol/L的U0126和50μg/L的PDGF- BB。以RT- PCR法检测各组ERK1和TGF-β1的mRNA表达，免疫组化法检测A、B4、C4和D组中以上蛋白的表达。结果 RT- PCR提示B1、B2、B3、B4组ERK1 mRNA表达均显著低于A组（均P＜0.01），U0126以浓度依赖的方式抑制PDGF诱导的ASMC中ERK的活化，C1、C2、C3、C4组ERK1 mRNA表达均显著高于A组（均P＜0.01），ERK1 mRNA的表达与PDGF- BB存在明显的浓度依赖关系，D组与A组比较无统计学差异（P＞0.05）。免疫组化提示B4组ASMC中ERK1蛋白表达显著低于A组，C4组显著高于A组（均P＜0.01），D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）；B4组TGF-β1蛋白表达显著低于A组，C4组显著高于A组，同时C4组显著高于B4组（均P＜0.01），D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）。结论 PDGF可剂量依赖性激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路，同时伴随TGF-β1信号通路的活化。ERK通路参与了ASMC增殖的细胞内信号转导过程，PDGF可能经ERK环节促进TGF-β1通路活化。
关键词： 哮喘 气道平滑肌细胞 细胞外调节激酶 气道重塑 转化生长因子- β1
