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优化改良PCR法检测石蜡组织标本中结核分枝杆菌
临床病理活检中肺外器官结核要多于肺结核[1],而病理学诊断是肺外结核病确诊的重要手段.结核病组织标本有其特征性的病理学形态特点,病理诊断医师可以怀疑其结核病变,但确诊需依靠抗酸杆菌染色等结果.但实践中抗酸杆菌染色等阳性率低,漏检率高[2].随着分子生物学检测技术在病理学诊断中的应用,部分大型医院已经应用荧光PCR法检测石蜡组织标本中的结核杆菌[3-8].但迄今为止,所有经过食品药品监督管理部门批准的结核分枝杆菌PCR试剂,其适用范围基本均为痰液等液体标本,而都未涵盖到石蜡组织标本.因此,每个医院均是在自行摸索检测方法.本单位经过近2年的实验,探索出一种利用现有的商品化试剂,优化部分实验程序,从而可以更好应用于石蜡组织标本的方法,现介绍如下.
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Real-time PCR检测麻风患者治疗前后及少菌型石蜡标本中麻风菌DNA的价值
目的 应用已建立的实时定量荧光PCR(real-time PCR)方法检测少菌型麻风(PB)患者的石蜡标本,探讨该方法对BI为0患者的辅助诊断价值.方法 从石蜡标本中提取的DNA进行麻风菌重复序列的特异性real-time PCR检测,包括短程联合化疗(MDT)治疗前后标本共92例;2008年和2013年收集的界限类偏瘤型麻风(BL)石蜡标本分别为7例和8例.并检测70例临床诊断PB和未定类麻风,同时将RT-PCR检测结果与病理分析结果进行比较.结果 92例(LL:19例;BL:20例;BB:20例;BT:16例;TT:17例)不同型别麻风患者的石蜡标本检测阳性率治疗前、治疗后分别为100.00％,100.00％,90.00％,87.50％,50.00％与40.00％,40.00％,0,0,22.22％.比较保存5年前后15例BL患者石蜡标本,检测结果差异无统计学意义.70例临床诊断PB和未定类麻风病患者的石蜡标本real-time PCR检测阳性率为71.43％(50/70),病理检测与临床符合率为51.43％(36/70),两者的阳性检测率差异有统计学意义(P＜0.05).结论 建立TaqMan(水解探针)技术的real-time PCR方法可以快速、特异、灵敏的检测石蜡标本中的麻风菌DNA,提高抗酸染色阴性标本的检测阳性率,对临床诊断的指导意义重大.
