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密度梯度离心结合Keihuaer抗酸染色法富集孕妇外周血中FNRBC的研究
目的 探索建立一种简便、快速、较低成本的用于孕妇外周血胎儿有核红细胞(FNRBC)富集的实验方法.方法 采集18名孕周在8～16周的孕妇外周血10 ml,经Percoll不连续密度梯度离心初步分离后,运用Keihuaer抗酸染色法对玻片上的细胞进行染色标记,显微镜下观察、辨别FNRBC的特殊染色及形态,对阳性涂片者进一步行胎儿血红蛋白(HBF)特异性抗体标记以证实其胎源性.结果 经Keihuaer抗酸染色处理,阳性FNRBC的胞浆染色呈深红色,核蓝色,而母亲的有核红细胞胞浆不着色.18名孕妇外周血中有14名可检出FNRBC,平均1～6个阳性FNRBC/病例,阳性检出率为77.8%.14例FNRBC阳性玻片经HBF抗体标记亦证实相同结果,而4例Keihuaer抗酸染色阴性病例亦表现HBF标记阴性,两者检出符合率100.0%.结论 密度梯度离心结合Keihuaer抗酸染色法用于富集FNRBC 具有较高的特异性,实验操作方法简便、快速,有望用于无创性产前基因诊断的推广应用.
关键词： 密度梯度离心 胎儿有核红细胞 Keihuaer抗酸染色 胎儿血红蛋白 -
Keihuaer抗酸染色标记FNRBC结合多重置换扩增行产前基因诊断的初步研究
目的 探讨Keihuaer抗酸染色法标记孕妇外周血中胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cell , FNRBC),并结合单细胞聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)技术行产前性别相关基因诊断的可行性. 方法 采集12例孕周为10周～16周的孕妇外周血10ml,经Percoll不连续密度梯度离心初步分离后,运用Keihuaer抗酸染色法对FNRBC进行特殊染色标记,显微操作法获取阳性单个靶细胞,经过多重置换扩增,全基因组扩增产物作为PCR模板,行STS (steroid sufatase)基因同源序列PCR性别诊断,以验证靶细胞的胎源性.结果 12例孕妇外周血中FNRBC阳性标记11例,1例未获取FNRBC;对获取的4个FNRBC单细胞进行性别初步诊断,其中2例证实为男胎,2例为女胎,经证实均与临床诊断相符合,准确率为100%.结论用Keihuaer抗酸染色标记及显微操作法获取的FNRBC,经多重置换扩增后可用于无创性产前基因诊断,实验操作可行、诊断准确,具有重要临床应用价值.
