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Tumstatin45-132文献资料
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TNFα-Tumstatin45-132分子构建、生物学特征预测和活性验证
目的 构建人重组TNFα-Tumstatin45-132融合蛋白的表达载体,预测接头的合理性和可行性,并对融合蛋白活性进行验证.方法 采用基因融合序列重叠延伸(SOE)策略,构建新型TNFα-Tumstatin45-132表达载体;应用核酸和蛋白质序列软件Antheprot和PepTool对融合基因及接头部位翻译后在二级结构水平上的柔性、抗原性、亲水性等生物特性加以预测;用细胞毒试验和内皮细胞增殖试验测定表达的融合蛋白活性.结果 构建新型重组TNFα-Tumstatin45-132融合基因,经DNA测序证实与设计完全一致;TNFα-Tumstatin45-132融合基因的氨基酸序列经软件分析,并与TNFα和Tumstatin45-132单独分析的结果比较,未出现新的抗原性,亲水性没有改变,接头部位具有很低的抗原性,接头部位呈中性;表达的融合蛋白经证实具有杀伤L929细胞和抑制ECV304细胞增殖的作用.结论 通过计算机软件对TNFα-Tumstatin45-132融合蛋白的预测,并与TNFα和Tumstatin45-132分别对比分析,有利于合理设计融合蛋白,大程度地保留TNFα和Tumstatin45-132各自的生物活性和功能;生物活性分析证实设计具有一定的科学性和合理性.
关键词： 融合蛋白 肿瘤坏死因子 Tumstatin45-132 计算机模拟
