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弓形虫抗血清IgG的制备及其检测效果研究
目的比较弓形虫不同免疫原所制备抗血清IgG的检测效果,优选高效价的抗体诊断试剂.方法制备弓形虫的细胞质抗原(C)、代谢抗原(S).用抗原C、C+S、S及活虫(P)各免疫2只家兔,收集抗血清经纯化而获得IgG抗体(多抗)并制备酶标记抗体;用上述4种多抗与对应的多抗-HRP组合成4种双抗体夹心型ELISA,检测人血清CAg和C、S抗原,评价试剂的敏感性;抗血清与疟原虫、隐孢子虫等抗原进行交叉反应性试验,评价试剂的特异性;采用捕获法检测人血清IgM抗体,比较4种多抗-HRP的检测效果.结果各种ELISA夹心法同步检测CAg阳性标本7例,阴性样本8例,均未出现假阴性和假阳性反应,其OD均值的P/N比值依次为C+C组33.5、S+S组27.8、CS+CS组21.2、P+P组13.2;C和S抗原的低检出量均为0.5μg/ml;与其它寄生虫未出现交叉反应.4种多抗-HRP同步检测IgM抗体阳性标本3例,阴性样本7例,均未出现假阴性和假阳性反应,其OD均值的P/N值高的是抗C-HRP.结论4种抗体用于检测人血清IgM抗体、CAg、C和S抗原以及其它抗原的结果表明,各种抗体试剂均具有良好的敏感性和特异性,其中以抗C抗体试剂为满意.(2)4种组合形式的夹心ELISA,检测弓形虫抗原的差异无统计学意义,表明弓形虫C和S抗原间存在着共同抗原成分.
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弓形虫循环抗原诊断试剂的研究
目的比较弓形虫不同免疫原所制备抗体检测CAg的效果,优选高效价的抗体诊断试剂.方法制备弓形虫的细胞质抗原(C)、代谢抗原(S).用抗原C、C+S、S及活虫各免疫2只家兔,收集抗血清经纯化而获得IgG抗体(多抗)并制备酶标记抗体;用上述4种多抗与多抗-HRP组合成16种双抗体夹心型ELISA,检测人血清CAg和C、S抗原,评价试剂的敏感性;抗血清与疟原虫、隐孢子虫等抗原进行交叉反应性试验,评价试剂的特异性.结果各种ELISA夹心法同步检测CAg阳性样本7例,阴性样本8例,均未出现假阴性和假阳性反应,其OD均值的P/N比值依次为C+C组33.5、S+S组27.8、CS+CS组21.2、P+P组13.2;C和S抗原的低检出量均为0.5 μg/ml;与其它寄生虫未出现交叉反应.结论 (1)4种抗体用于检测人血清CAg、C和S抗原以及其它抗原的结果表明,各种抗体试剂均具有良好的敏感性和特异性,其中以抗C抗体试剂为满意.(2)16种组合形式的夹心ELISA,检测弓形虫抗原的差异无统计学意义,表明弓形虫C和S抗原间存在着共同抗原成分.
关键词： 弓形虫免疫原 抗体诊断试剂 双抗体夹心型ELISA 循环抗原
