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盐酸埃他卡林对动脉平滑肌ATP敏感性钾通道与其开放剂[3H]P1075特异性结合与解离动力学过程的影响
目的:研究盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride,Ipt)对[3H]P1075与血管平滑肌ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive potassium channel, KATP)结合和解离动力学过程的影响.方法:KATP开放剂[3H]P1075与大鼠去内皮主动脉平滑肌特异性结合与解离的动力学试验.结果:Ipt预先与主动脉平滑肌孵育后,[3H]1075的结合速率减慢,结合幅度降低,平衡结合常数KA降为对照组的 28.3%(P＜0.01);结合[3H]P1075的解离速率增快,解离幅度增加,平衡解离常数KD则较对照组增加 3.53 倍(P＜0.01).在相同条件下,KATP开放剂吡那地尔(pinacidil, Pin)的作用与之相似,KA值降为对照组的35%(P＜0.01),KD值较对照组增加 2.88 倍(P＜0.01).结论:Ipt与KATP开放剂Pin的作用相似,两者均可变构调节KATP,抑制其与开放剂的结合过程,促进其解离过程.
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盐酸埃他卡林对[3H]格列本脲与动脉平滑肌KATP结合和解离动力学过程的影响以及与核苷酸的交互作用
目的研究盐酸埃他卡林(Iptakalim hydrochloride,Ipt)对[3H]格列本脲(glibenclamide, Gli)与大鼠血管平滑肌ATP敏感性钾通(ATP-sensitive potassium channel, KATP)的硫脲受体(Sulfonylurea receptor, SUR2B)结合和解离动力学过程的影响,并比较其作用特点与核苷酸类物质的异同点及它们之间的交互效应.方法 KATP拮抗剂[3H]Gli与大鼠去内皮主动脉平滑肌特异性结合与解离的动力学试验.结果 (1)在浓度为10 pmol*L-1～0.5 mmol·L-1范围内,Ipt不能取代SUR2B与[3H]Gli之间的特异性结合.Ipt 100 μmol*L-1调节［3H］Gli与SUR2B特异性结合的动力学过程的特征为抑制其结合动力学过程，使其结合速率减慢，结合幅度降低；促进其解离动力学过程，使其解离速率加快，解离幅度增加。（2）ATP 1 mmol*L-1调节［3H］Gli与SUR2B特异性结合和解离动力学过程的特征与Ipt相反：促进其结合动力学过程，使结合速率加快，结合幅度增加；抑制其解离动力学过程，使解离速率减慢，解离幅度降低；ATP与Ipt之间存在交互调节的作用。（3）ADP 1 mmol*L-1调节［3H］Gli与SUR2B特异性结合和解离动力学过程的特征与Ipt相似：抑制其结合动力学过程，使结合速率减慢，结合幅度降低；促进其解离动力学过程，使解离速率加快，解离幅度增加；ADP与Ipt之间也存在交互调节的作用。（4）UDP的作用特征既不同于ATP，也不同于ADP，对［3H］Gli与SUR2B的结合与解离动力学过程无明显影响，且与Ipt之间不存在交互调节的作用。结论 Ipt与SUR2B上KATP拮抗剂结合位点无亲和力，但有负性变构调节作用；其作用特征与ATP相反，而与ADP相同，并与它们之间存在交互效应；其作用特征不同于UDP，且不存在交互效应。
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盐酸埃他卡林对心肌ATP-敏感性钾通道的作用
目的在急性分离的豚鼠心室肌细胞上观察盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride, Ipt)对钾电流的影响;研究Ipt对[3H]格列本脲(glibenclamide, Gli)与心肌ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive potassium channel, KATP)的硫脲受体(Sulfonylurea receptor, SUR2A)结合特征以及[3H]Gli与心肌膜KATP结合和解离动力学过程的影响,以评价Ipt对心肌KATP的作用.方法分离豚鼠心室肌细胞,用全细胞记录技术记录细胞钾电流,通过浴槽内灌流给药,观察盐酸埃他卡林对钾电流的影响.KATP拮抗剂[3H]Gli与大鼠心肌膜特异性结合与解离的动力学试验.结果①Ipt在浓度为1和100 μmol*L-1时,均可明显引起豚鼠心室肌外向钾电流I-U曲线上移,Ipt作用后5 min内细胞外向钾电流强度分别增强为初始电流强度的124.9%±9.5%(n=5)和151.6%±11.2%(n=7),与溶媒对照组(69.8%±3.5%,n=7)比较差异均有统计学意义(P<0.01).在相同条件下,KATP开放剂吡那地尔(pinacidil, Pin)的作用与之相似,也可明显引起豚鼠心室肌外向钾电流I-U曲线上移,显著增强细胞外向钾电流.②非标记Gli与[3H]Gli和大鼠心肌膜标本在25℃孵育60 min,可浓度依赖性地抑制[3H]Gli与心肌膜SUR2A的特异性结合,其IC50值为(195±62) nmol*L-1.相同实验条件下,Ipt 1 nmol*L-1～1 mmol*L-1对[3H]Gli与大鼠心肌膜KATP SUR2A特异性结合无抑制作用,Pin10 μmol*L-1～1 mmol*L-1也不抑制[3H]Gli与大鼠心肌膜SUR2A的特异性结合.③Ipt 0.1 mmol*L-1不影响[3H]Gli与心肌膜蛋白结合的结合动力学过程,但可加速其解离动力学过程,相同实验条件下,Pin的作用特点与Ipt相似.结论 Ipt对心室肌细胞钾电流有增强作用;SUR2A上激活剂作用位点不同于拮抗剂结合位点,Ipt的作用位点也不同于硫脲类药物结合位点;Ipt对心肌KATP拮抗剂结合位点存在变构调节,降低SUR2A与KATP拮抗剂Gli的亲和力.
