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龙葵碱对HepG2人肝癌细胞NAT酶动力学常数的影响
目的 探讨龙葵碱对HepG2细胞NAT酶米氏常数Km及大反应速率Vmax的影响.方法 MTT法测定龙葵碱对消化系统SGC-7901人胃癌、HepG2人肝癌、Ls-174人大肠癌3种肿瘤细胞株的细胞毒作用,采用高效液相色谱(HPLC)法,以2-AF为底物,以2-AF的浓度为底物浓度,在以HepG2完整细胞及细胞质内2-AF被NAT酶乙酰化为2-AAF的速度为NAT酶的反应速率,采用双倒数作图法,以底物2-AF浓度的倒数1/S对NAT反应速率的倒数1/V作直线,得出回归方程,计算Km和Vmax.结果 MTT法测定表明龙葵碱对HepG2人肝癌细胞比较敏感,酶动力学研究表明,以2-AF为底物,对于HepG2完整细胞,阴性对照组的Km和Vmax分别为(2.37×10-3±8.37×10-5) mmol·L-1、(9.16×10-4±7.54×10-5) nmol·106 cells-1,龙葵碱组的Km和Vmax分别为(2.22×10-3±9.05×10-5) mmol·L-1和(5.14×10-4±3.72×10-5) nmol·106 cells-1.对于HepG2细胞质,阴性对照组的Km和Vmax分别为(8.95×10-3±2.61×10-4) mmol·L-1、(2.55×10-6±1.92×10-8) μmol·min-1g-1 Pro,龙葵碱组的Km和Vmax分别为(9.48×10-3±3.63×10-4) mmol·L-1和(2.43×10-6±1.32×10-8) μmol·min-1 g-1 Pro,统计学表明对于HepG2完整细胞和细胞质,阴性对照组和龙葵碱组的Km没有差异,而Vmax差异有显著性(完整细胞P<0.01,细胞质P<0.05).结论 龙葵碱是HepG2人肝癌细胞NAT酶2-AF底物的非竞争性抑制剂.
关键词： 龙葵碱 HepG2人肝癌细胞 NAT酶 米氏常数 最大反应速率
