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鞭毛帽蛋白FliD文献资料
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艰难梭菌鞭毛帽蛋白的功能研究
目的 验证艰难梭菌鞭毛帽蛋白FliD的黏附细胞活性以推测其在艰难梭菌感染中的作用,并鉴定其抗原性以测试其应用于候选艰难梭菌疫苗组分的可能性.方法 PCR获取VPI 10463全长fliD基因,构建pET-22b-fliD原核表达质粒,转化至BL21(DE3)中,诱导表达,Ni2+亲和层析纯化,进行N端测序验证.蛋白3次皮下免疫大耳白兔后间接ELISA法检测其血清特异IgG水平并鉴定抗原性.间接免疫荧光染色后流式细胞术检测黏附Vero细胞能力.结果 VPI10463的fliD基因钓取成功,与GenBank公布的其他9株艰难梭菌的fliD基因相似度在89％～100％.pET-22b-fliD表达质粒构建成功,表达蛋白大小为56 ku,N端测序序列为MSSIS,与预期一致.一步纯化得到的蛋白纯度为99％以上.ELISA检测3次免疫后效价达到105.用流式细胞术检测其可以黏附在Vero细胞表面.结论 构建的pET-22b-fliD表达质粒成功表达FliD,具有黏附细胞活性,在艰难梭菌感染过程中起黏附因子作用,其具有较高的抗原性可以作为预防艰难梭菌感染的候选抗原之一.
