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GATA2转录因子文献资料
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GATA2分子RNAi慢病毒颗粒的包装制备及表达研究
目的 制备GATA2分子慢病毒干涉颗粒,建立GATA2表达下调的K562稳定细胞系.方法 采用第3代慢病毒包装系统,将携带特异性干涉GATA2的DNA序列克隆入穿梭质粒PsicoR中,转染K562细胞,Western blot法检测对内源性GATA2干涉效果.在脂质体介导下,siGATA2质粒同包装质粒plP1、plP2、pl/VSVG 共同转染HEK 293T细胞,获得慢病毒干涉颗粒,感染K562细胞,检测干涉效果.结果 构建的重组质粒经酶切,测序鉴定结果 正确,并有干涉效果.该重组质粒与包装质粒共同转染HEK293T细胞,获得干涉慢病毒并利用该病毒建立稳定表达的siGATA2-K562细胞系,经Western blot鉴定,稳定细胞系的内源性GATA2表达下调.结论 成功制备siGATA2干涉病毒颗粒并构建siGATA2-K562稳定细胞系,为后续实验奠定基础.
